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legendkiller銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助建立逆轉錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細胞系的相關問題
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我最近看到一篇文章是“建立逆轉錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細胞系”的文章，他是先用病毒轉化哺乳動物細胞，然后培養(yǎng)獲得病毒顆粒，再用此病毒顆粒去感染腫瘤細胞來獲得逆轉錄病毒載體顆粒生產(chǎn)細胞系。 我想問一下，既然哺乳動物細胞能生產(chǎn)該病毒顆粒，為什么還要去感染腫瘤細胞呢 或是為什么不直接感染腫瘤細胞呢 |
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legendkiller
銀蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物技術藥物
送鮮花一朵 4樓2013-02-24 20:33:41
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2013-02-25 13:34:19
感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應助 2013-02-25 13:34:19
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作為外源基因導入的手段，假病毒顆粒侵染和普通的基因轉染有許多不同的特點。 一、假病毒侵染的導入效率要高于轉染。這一點在比較容易轉染的細胞上可能不明顯，但在比較難以轉染的細胞上，假病毒侵染就比轉染有優(yōu)勢的多，就lz帖中的疑問“為什么不直接感染腫瘤細胞呢？”，許多情況就是因為目的細胞系難以轉染，或是轉染率不高，不能滿足實驗的要求（比如基于shRNA的Knock down實驗，要求轉染率要大于50%，甚至70%），這時候用假病毒侵染就是解決問題的選擇之一（一般假病毒顆粒的生產(chǎn)細胞都是易于轉染的，比如HEK293）； 二、假病毒侵染導入的基因轉錄/表達的持續(xù)性要高于轉染。一般假病毒導入的基因，不易被宿主丟失，不僅在瞬時轉染的實驗中，基因轉錄/表達的持續(xù)時間長（比如Knockdown實驗中，假病毒侵染的Knockdown可以持續(xù)1week以上，而普通瞬時轉染的Knockdown效果，一般就2-4天，最多也不過10天），在穩(wěn)定轉染的實驗中，病毒侵染的細胞獲得穩(wěn)定表達（插入基因組）的效率也要高出普通轉染很多。 三、假病毒侵染的靈活性要比普通轉染高。比如做體內(nèi)轉染，在比如做特異細胞導入（普通轉染是非特異的導入，而假病毒侵染，可以通過改變病毒的包膜蛋白顆粒，而改變其侵染的嗜性，從而做到特異導入）。 假病毒侵染的優(yōu)勢還很多，當然并不是說病毒侵染就多么多么高級，這些都只是手段，根據(jù)不同的條件和目的供人選擇而已。希望能幫到lz。 |
2樓2013-02-23 12:48:43
3樓2013-02-23 13:55:06
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