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bubble1220銀蟲 (小有名氣)
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大家?guī)臀铱纯促|(zhì)粒腫木了？
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我的質(zhì)粒大小為2800bp，pUC18復(fù)制位點(diǎn) 第一次提取質(zhì)粒并單酶切驗(yàn)證結(jié)果正確，圖是這樣的 1 質(zhì)粒 2 單酶切，結(jié)果看起來是正確的，下面那條帶認(rèn)為是沒有酶切完全的 質(zhì)粒保存于-20度，2天后再拿出來酶切，結(jié)果圖是這樣的 3 質(zhì)粒 沒什么變成彌散的了？而且?guī)鸵埠蜕洗尾灰粯恿?br /> 4 單酶切 結(jié)果和上一次一樣，但是這回下面那條帶我就不認(rèn)為是沒切開的了，因?yàn)橘|(zhì)粒上也有一條，到底下面那條帶是什么��？ 未命名-2.jpg |
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bubble1220: 金幣+4, ★有幫助 2013-02-28 08:36:02
| 個人感覺可能是質(zhì)粒不純，本身兩條帶，離的比較近，濃度大的時(shí)候不容易被看出來，所以234會在同一個位置留有條帶，特別是34，貌似條帶的深淺都是一樣的。至于為啥彌散，可能是你第一次做的時(shí)候，不小心把酶飛進(jìn)去了，從你的3位置的質(zhì)粒高度與4位置的酶切高度相當(dāng)可以推測，以上僅是個人推測。 |
7樓2013-02-26 16:37:51
tianchunying
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建議你對質(zhì)粒進(jìn)行定量。一般鑒定酶切，需要的質(zhì)粒量一般在500ng--1ug，就足夠了，如果需要回收（尤其是回收小片段）時(shí)，則一般需要增加酶切的DNA量。 而酶切時(shí)，所需要的限制性內(nèi)切酶的用量，很多人都是憑經(jīng)驗(yàn)，但事實(shí)上，不同的酶，其活性單位定義都不一致。因而，憑經(jīng)驗(yàn)，很容易出現(xiàn)酶切不完全的情況，我建議你用Doulbe digestion disigner 軟件進(jìn)行雙酶切設(shè)計(jì)，該軟件可以根據(jù)你酶切的DNA量以及你的限制性內(nèi)切酶的供應(yīng)商來精確計(jì)算酶切時(shí)所需要的酶量，免除優(yōu)化酶切反應(yīng)的煩勞。 我們公司購買其使用權(quán)，很方便。據(jù)說現(xiàn)在還可以免費(fèi)試用，你可以試試。我在小木蟲上推薦過，你應(yīng)該可以搜到其鏈接。 祝好運(yùn)。 |
8樓2013-02-26 22:18:09
bingdong05
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9樓2013-02-27 09:21:31
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10樓2013-02-28 08:56:16
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