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[求助]
從基因文庫中篩選到目的基因后的分析
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各位蟲友：本人前段時間從構建好的基因文庫中通過功能篩選，篩選到了一株陽性克隆。接著對 測序結果在NCBI中比對，沒有能和測出的結果比對上的。因此不知道這段序列編碼的是什么酶。 接著把測出的序列用Vector NTI進行ORF分析，如果 將正向測序結果輸入（以M13+向開始）顯示整個序列被分成很多個ORF,并且最大ORF也只不過500bp，我想這應該不足以編碼我的目標蛋白（酰胺酶，實驗室克隆出的相同功能的酰胺酶700多bp）；如果將反向的測序結果輸入（以M13-向開始）顯示大致可以分倆個閱讀框，一個1600bp左右，一個有700bp左右。 對于這樣的結果我不知道該怎么分析，怎么設計引物克隆出目標編碼基因？ |
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9樓2013-04-17 11:01:21
qqxs
木蟲 (正式寫手)
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4樓2013-03-04 17:47:24
dmzha
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【答案】應助回帖
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| 你都知道序列怎么會克隆不出目標編碼基因呢？在分析的ORF（個人認為應該是反向測序結果）兩端設計引物就行了，然后在大腸桿菌中表達，得到的可溶性蛋白再進行酶學性質鑒定。如果在NCBI中沒有比對上，估計是新基因的可能性比較大。PS：就算是新基因，在NCBI數(shù)據(jù)庫中多少還是有同源性不是很高的基因存在。 |
5樓2013-03-04 21:34:07
6樓2013-03-06 09:05:08
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