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huazhiyun銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助小鼠T-bet基因表達(dá)載體構(gòu)建問題
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| 我想通過(guò)轉(zhuǎn)染T-bet基因表達(dá)質(zhì)粒誘導(dǎo)IFN-γ表達(dá)，但小鼠的T-bet基因CDS序列總是擴(kuò)不出來(lái)，具體方法是提取小鼠脾細(xì)胞總RNA，隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)，以cDNA為模板用T-bet的引物擴(kuò)增，準(zhǔn)備連接pCDNA3.1+載體。擴(kuò)了許多次測(cè)序結(jié)果都不正確，文獻(xiàn)中有說(shuō)需要一些刺激物增加T-bet表達(dá)，但我只需要T-bet序列，買這些刺激物太浪費(fèi)了，有哪位大神曾經(jīng)擴(kuò)出來(lái)過(guò)，請(qǐng)教具體方法，或者有已經(jīng)構(gòu)建好的表達(dá)質(zhì)粒那再好不過(guò)。 |
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gyesang
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2樓2013-03-05 18:30:36
huazhiyun
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2013-03-06 09:11:32
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