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wygcsu

木蟲(chóng) (小有名氣)

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提取RNA反轉(zhuǎn)錄后成cDNA后，測(cè)cDNA的濃度比RNA濃度高了幾十倍正常嗎？理論上反轉(zhuǎn)錄效率100%不應(yīng)該是前后濃度差不多嗎？求大神指教。

[ Last edited by wygcsu on 2013-3-6 at 19:39 ]

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1樓 2013-03-06 19:36:10

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小love肖

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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反轉(zhuǎn)后的cDNA不用測(cè)濃度吧，我都是直接稀釋一倍，然后直接PCR擴(kuò)增了，沒(méi)有問(wèn)題啊，不知道怎么測(cè)濃度。

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9樓2013-03-08 09:03:10

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wanghh_lzu

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我問(wèn)過(guò)生物公司，他們的回復(fù)是：反準(zhǔn)錄時(shí)會(huì)用到一些random 什么的primer，但這些一般都是過(guò)量的所有反準(zhǔn)錄完了會(huì)有寫殘留，所以你測(cè)CDNA的濃度才會(huì)跟以前的不一樣，希望對(duì)你有幫助。

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3樓2013-03-06 23:29:51

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yangjianchen

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cDNA可以測(cè)濃度么？

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4樓2013-03-07 09:21:00

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sicauwht

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樓主，cDNA是不能拿來(lái)測(cè)濃度的，因?yàn)槟阍诜崔D(zhuǎn)錄過(guò)程中加入的那些引物dNTP什么的都會(huì)影響的，你就只能以你反轉(zhuǎn)錄時(shí)加入的RNA量來(lái)計(jì)算，按理論100%轉(zhuǎn)錄率來(lái)算比較好，我之前也和你犯過(guò)同樣的錯(cuò)，呵呵

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被時(shí)代和社會(huì)和諧的80后！

5樓2013-03-07 09:45:56

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