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請(qǐng)高手解答細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)蛋白提取及純化
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目前想得到一個(gè)改造過(guò)的蛋白，想通過(guò)瞬轉(zhuǎn)COS-7后得到蛋白，免疫熒光檢測(cè)目的蛋白已經(jīng)得到較高表達(dá)（大于50%），想進(jìn)一步純化出我想要的蛋白，目前純?cè)诘膯?wèn)題有以下幾點(diǎn)： 1.細(xì)胞的裂解，因?yàn)橐ＷC蛋白的活性，是不是還是采用溫和的裂解方法，有沒(méi)有比較好用的裂解液推薦一下。 2。因?yàn)槲业牡鞍椎入婞c(diǎn)在9左右，想用陽(yáng)離子交換層析的方法，擬采用SP SepharoseF F,用50mMOL的磷酸鹽緩沖液，以0-1Mol 氯化鈉洗脫。 3.用分子篩進(jìn)一步純化蛋白。 不知道這樣的方法是否可行，本來(lái)想委托公司純化，可是公司說(shuō)必須從轉(zhuǎn)染開(kāi)始就委托給他們，否則不好說(shuō)能得到多少純化樣品，而且答復(fù)是真核蛋白裂解細(xì)胞純化得到的蛋白純度很低，到不了50%，可是這種純度沒(méi)辦法繼續(xù)用于下游的活性鑒定！請(qǐng)高手幫忙看看！多謝啦 |
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panda73
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