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husthl鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助大腸桿菌感受態(tài)制備方法大全
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各位蟲友們，我最近在制備大腸桿菌感受態(tài)，效果不是很好，請問大家又木有比較好的制備方法，跟我分享一下唄。 謝謝。。。 |
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chunhua0312
鐵蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2013-03-15 15:40:19
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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我們實驗室制作E.coli感受態(tài)的方法： 1.將保存的菌液在抗生素平板上劃線，37℃倒置培養(yǎng)12--16h。 2.挑取直徑約1mm的單菌落接入5ml LB中，37℃，200rpm振蕩至OD600=0.5. 3.將菌液加入2ml離心管中，4000rpm，4℃，5min，棄培養(yǎng)液。（離心三次） 4.加入1ml預(yù)冷的0.1 M CaCl2，低速渦旋打勻。 5.4000rpm，4℃，離心10min，棄上清。 6.加入200微升預(yù)冷的0.1M CaCl2,渦旋打勻。 7.加入等體積15%甘油，液氮速凍，—80℃保存。 這是小量制取的方法，也可以用多搖點菌液大量制取。 |
3樓2013-03-15 16:21:28
cobble_hu
新蟲 (初入文壇)
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4樓2013-03-17 11:15:14
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