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zhaoxiaoming木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
如何證明兩蛋白是異源二聚體
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| 各位秀友，已知兩個(gè)相同類型的蛋白（同一家族含相同類型結(jié)構(gòu)域，轉(zhuǎn)錄因子）能夠相互作用，也有報(bào)道說(shuō)可以形成異源二聚體，請(qǐng)問(wèn)用什么方法可以證明它們確實(shí)是以異源二聚體的形式存在呢？？求賜教，謝謝�。� |
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3樓2013-03-19 08:53:39
xiaoxiang5
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5樓2013-03-19 18:17:37
userhung
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zhaoxiaoming: 金幣+1, xiexie 2013-03-25 09:02:39
zhaoxiaoming(金幣+1): 謝謝參與
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http://bbs.bbioo.com/thread-145685-1-1.html http://www.patent-cn.com/C12N/CN1212017.shtml http://bbs.bbioo.com/thread-144137-1-1.html |
10樓2013-03-19 20:14:58
dy_414
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21樓2013-03-19 22:21:42
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22樓2013-03-20 10:55:38
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mlanqiang
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34樓2013-03-21 13:41:40
januaryzjr
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38樓2013-03-22 07:14:48
mzhyan
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43樓2013-03-22 08:07:08
凌波麗
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先用非變性凝膠電泳測(cè)定一次樣品分子量，再用SDS-PAGE走一次同一種樣品的電泳，后者如果出現(xiàn)兩條不同的帶，而且兩條帶的對(duì)應(yīng)的分子量相加后等于用非變性凝膠電泳測(cè)定一次樣品分子量的分子量，才可能存在：形成異源二聚體。 但是這只是說(shuō)有可能，并不表示在細(xì)胞內(nèi)部必定存在兩個(gè)相同類型的蛋白（同一家族含相同類型結(jié)構(gòu)域，轉(zhuǎn)錄因子）能夠相互作用，也有報(bào)道說(shuō)可以形成異源二聚體。首先需要做一個(gè)細(xì)胞外的異源二聚體（與電泳所用 的樣品相同）的蛋白質(zhì)二聚體的功能測(cè)試，如果確定有功能，至少能夠到達(dá)和結(jié)合到轉(zhuǎn)錄因子的功能位點(diǎn)（與DNA特定片段或者去其他轉(zhuǎn)錄因子能夠相互作用而促進(jìn)形成轉(zhuǎn)錄機(jī)器）。然后最好確定一下:細(xì)胞內(nèi)的能夠到達(dá)和結(jié)合到轉(zhuǎn)錄因子的功能位點(diǎn)（與DNA特定片段或者去其他轉(zhuǎn)錄因子能夠相互作用而促進(jìn)形成轉(zhuǎn)錄機(jī)器），可以用ChIP或者GFP等。 Transcriptional factor的定義： 1.轉(zhuǎn)錄因子（Transcriptional factor）：真核細(xì)胞的RNA聚合酶基因轉(zhuǎn)錄時(shí)在啟動(dòng)子部位正確啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄所需要的蛋白質(zhì)分子。根據(jù)其功能可分為三類：（1）通用轉(zhuǎn)錄因子；（2）序列特異性轉(zhuǎn)錄因子；（3）其他輔助因子。參見(jiàn)：譚景瑩、董志偉 主編，英漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)詞典，科學(xué)出版社，2000，P993. 2.transcription factor, molecule that controls the activity of a gene by determining whether the gene’s DNA (deoxyribonucleic acid) is transcribed into RNA (ribonucleic acid). The enzyme RNA polymerase catalyzes the chemical reactions that synthesize RNA, using the gene’s DNA as a template. Transcription factors control when, where, and how efficiently RNA polymerases function. http://www.britannica.com/EBchec ... ranscription-factor 3.transcription factor, a specific protein required for the initiation of transcription by an RNA polymerase. Each polymerase has its own set of transcription factors. Mosby's Medical Dictionary, 8th edition. © 2009, Elsevier. http://medical-dictionary.thefre ... anscription+factors 綜上述，轉(zhuǎn)錄因子的現(xiàn)在的概念更側(cè)重于生物功能，而不是強(qiáng)調(diào)其是否一定要直接地結(jié)合到特定DNA調(diào)控序列上，當(dāng)然多數(shù)轉(zhuǎn)錄因子的確直接地結(jié)合到特定DNA調(diào)控序列上。 |
45樓2013-10-19 16:20:05
冼亮淀粉酶
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46樓2013-10-19 19:25:30
凌波麗
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|
是告訴你的非變性凝膠電泳是不能確定分子量的？？？�。�！ 請(qǐng)閣下去看看：[美]J.E.科林根 等 著，李慎濤 等譯，精編蛋白質(zhì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室南，科學(xué)出版社，2007，第307頁(yè)到308頁(yè)。 告訴你：：[美]J.E.科林根 等 著，李慎濤 等譯，精編蛋白質(zhì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室南，科學(xué)出版社，2007，第307頁(yè)到308頁(yè)，明確寫(xiě)了用非變性不連續(xù)電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量的實(shí)驗(yàn)方案！ 另外測(cè)定非公價(jià)結(jié)合的多聚體的分子量用非變性條件下的凝膠過(guò)濾層析也可以 。請(qǐng)見(jiàn)：[美]J.E.科林根 等 著，李慎濤 等譯，精編蛋白質(zhì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)室南，科學(xué)出版社，2007，第234頁(yè)到240頁(yè)。 |
47樓2013-10-19 22:21:07
冼亮淀粉酶
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48樓2013-10-20 05:09:12
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阿桂金4樓
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失落的豇豆6樓
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xiaoyu92711樓
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yushenye12樓
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yingying158814樓
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[考研] 08工學(xué)調(diào)劑 +5 | 用戶573181 2026-03-20 | 5/250 |
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[考博] 招收博士1-2人 +3 | QGZDSYS 2026-03-18 | 3/150 |
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[考研] 0817調(diào)劑 +3 | 沒(méi)有答案_ 2026-03-14 | 3/150 |
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[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
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[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
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[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
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[考研] 334求調(diào)劑 +3 | 志存高遠(yuǎn)意在機(jī)?/a> 2026-03-16 | 3/150 |
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[基金申請(qǐng)] 被我言中：新模板不強(qiáng)調(diào)格式了，假專家開(kāi)始管格式了 +4 | beefly 2026-03-14 | 4/200 |
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[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
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[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
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[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
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[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
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[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
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