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wshcf7金蟲 (小有名氣)
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[求助]
HPLC純度分析
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各位老蟲,我最近在做一抗體片段的純度分析(一類新藥,沒有標(biāo)準(zhǔn)品),參照藥典三部上一般運(yùn)用電泳和分子排阻HPLC法進(jìn)行分析,電泳法沒什么問題,就是在運(yùn)用液相分析時(shí)不是太清楚相關(guān)情況,忘有了解的蟲友發(fā)表下自己的意見,謝謝了! 1. 我們的樣品里面有單體、二倍體和多倍體同時(shí)存在,實(shí)驗(yàn)的目的是要得出單體和二倍體的含量 2.我用常規(guī)的緩沖鹽溶液進(jìn)行分析時(shí),根本得不出結(jié)果,峰形非常差;而將樣品用6M鹽酸胍處理后,便能得到理想的峰圖和純度結(jié)果 而藥典上其他類型的單抗或者重組藥物在用分子排阻HPLC法分析純度時(shí),一般的PBS緩沖液或者PBS含有1%異丙醇即可,。請問將樣品用鹽酸胍處理后進(jìn)行HPLC純度分析的方法是否可行,在進(jìn)行新藥申報(bào)時(shí)會不會遇到麻煩?因?yàn)?M鹽酸胍時(shí)蛋白已經(jīng)變性了;另外,緩沖鹽中加入1%異丙醇的作用是什么,是否會使蛋白變性? |
至尊木蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
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銅蟲 (小有名氣)

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