| 30 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2912 | 回復(fù): 29 | |||
[交流]
就鑒別雙歧桿菌
|
|||
哪位大俠做過(guò)用16S鑒別雙歧桿菌?用細(xì)菌通用引物能做嗎?謝謝! |
» 搶金幣啦!回帖就可以得到:
+1/268
+1/184
+1/82
+2/76
+2/56
+1/44
+1/39
+1/36
+1/33
+1/29
+1/18
+1/16
+1/15
+1/14
+1/12
+1/9
+1/6
+1/6
+1/4
+1/3
銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
|
我這幾天在做16S雙歧桿菌的鑒定,剛開(kāi)始跑沒(méi)條帶,后來(lái)好不容易有了,可又好多條帶,郁悶!可否幫我分析一下。恐x謝!條件是: 94度 4分鐘 94度 30秒 55度 30秒 72度 2分鐘 30個(gè)循環(huán) 72度 10分鐘 梯度PCR也做了,條帶也很多,這么辦啊? |
木蟲(chóng) (知名作家)
銅蟲(chóng) (小有名氣)
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
降落PCR(touchdown PCR),一種PCR技術(shù),主要用于PCR的條件的優(yōu)化。在許多情況下引物的設(shè)計(jì)使得PCR難以進(jìn)行,例如特異性不夠易錯(cuò)配等。退火溫度過(guò)高會(huì)使PCR效率過(guò)低,但退火溫度過(guò)低則會(huì)使非特異擴(kuò)增過(guò)多。這雖然可以通過(guò)反復(fù)嘗試來(lái)優(yōu)化,但費(fèi)時(shí)費(fèi)力。降落PCR提供了一個(gè)較為簡(jiǎn)易的優(yōu)化方法。其原理大致是這樣的。首先在較高的溫度下擴(kuò)增,此時(shí)雖然擴(kuò)增效率低,但非特異擴(kuò)增基本沒(méi)有。隨著退火溫度的降低,非特異擴(kuò)增會(huì)逐步增多。但由于此時(shí)特異的擴(kuò)增產(chǎn)物已經(jīng)達(dá)到一定的數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì),因此會(huì)對(duì)非特異擴(kuò)增產(chǎn)生強(qiáng)烈的競(jìng)爭(zhēng)抑制,從而大幅提高PCR的特異性和效率。這一PCR技術(shù)已經(jīng)大量地進(jìn)入醫(yī)療臨床應(yīng)用,F(xiàn)在,以高通量PCR為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法、如人的 HLA分型 大多采用這一技術(shù)。 設(shè)計(jì)多循環(huán)反應(yīng)的程序,以使相連循環(huán)的退火溫度越來(lái)越低。由于開(kāi)始時(shí)的退火溫度選擇為高于估計(jì)的Tm值,隨著循環(huán)的進(jìn)行,退火溫度逐漸降到Tm值,并最終低于這個(gè)水平,用于確保第一個(gè)引物—模板雜交事件發(fā)生在最互補(bǔ)的反應(yīng)物之間,即那些產(chǎn)生目的擴(kuò)增產(chǎn)物的反應(yīng)物之間。盡管退火溫度最終會(huì)降到非特異雜交的Tm值,但此時(shí)目的擴(kuò)增產(chǎn)物已開(kāi)始幾何擴(kuò)增,在剩下的循環(huán)中處于超過(guò)任何滯后(非特異)PCR產(chǎn)物的地位。 說(shuō)白了就是先提高退火溫度,將目的片段擴(kuò)增出來(lái),然后逐漸降低退火溫度,這樣做的好處就是能夠減少非特異性條帶的擴(kuò)增。 |
版主 (文學(xué)泰斗)
銅蟲(chóng) (小有名氣)




| 30 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +10 | z1z2z3879 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +8 | 北道巷 2026-03-24 | 8/400 |
|
|
[考研] 0856材料專(zhuān)碩353求調(diào)劑 +9 | NIFFFfff 2026-03-20 | 9/450 |
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 柚柚yoyo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專(zhuān)碩324分,求調(diào)劑 +6 | jiajunX 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚(yú)567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +6 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
[考研] 化工專(zhuān)碩求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
[考研] 一志愿吉大化學(xué)322求調(diào)劑 +4 | 17501029541 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
[考研] 335求調(diào)劑 +4 | yuyu宇 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +8 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿海大,0703化學(xué)學(xué)碩304分,有大創(chuàng)項(xiàng)目,四級(jí)已過(guò) +6 | 幸運(yùn)哩哩 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | Zhangbod 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 085601調(diào)劑 358分 +3 | zzzzggh 2026-03-20 | 4/200 |
|