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[交流]
就鑒別雙歧桿菌
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哪位大俠做過用16S鑒別雙歧桿菌��？用細菌通用引物能做嗎？謝謝！ |
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27樓2013-03-26 13:30:04
★
星星楊(金幣+1): 謝謝參與
星星楊(金幣+1): 謝謝參與
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2013-03-20 10:54:41
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我這幾天在做16S雙歧桿菌的鑒定，剛開始跑沒條帶，后來好不容易有了，可又好多條帶，郁悶��！可否幫我分析一下��？謝謝��！條件是： 94度 4分鐘 94度 30秒 55度 30秒 72度 2分鐘 30個循環(huán) 72度 10分鐘 梯度PCR也做了，條帶也很多，這么辦�。� |
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2013-03-20 16:37:31, 646 K
3樓2013-03-20 16:42:04
星星楊7樓2013-03-21 05:42:49
9樓2013-03-21 07:55:08
10樓2013-03-21 10:14:00
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15樓2013-03-22 08:37:30
17樓2013-03-22 08:56:50
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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降落PCR（touchdown PCR），一種PCR技術(shù)，主要用于PCR的條件的優(yōu)化。在許多情況下引物的設(shè)計使得PCR難以進行，例如特異性不夠易錯配等。退火溫度過高會使PCR效率過低，但退火溫度過低則會使非特異擴增過多。這雖然可以通過反復(fù)嘗試來優(yōu)化，但費時費力。降落PCR提供了一個較為簡易的優(yōu)化方法。其原理大致是這樣的。首先在較高的溫度下擴增，此時雖然擴增效率低，但非特異擴增基本沒有。隨著退火溫度的降低，非特異擴增會逐步增多。但由于此時特異的擴增產(chǎn)物已經(jīng)達到一定的數(shù)量優(yōu)勢，因此會對非特異擴增產(chǎn)生強烈的競爭抑制，從而大幅提高PCR的特異性和效率。這一PCR技術(shù)已經(jīng)大量地進入醫(yī)療臨床應(yīng)用。現(xiàn)在，以高通量PCR為基礎(chǔ)的檢測方法、如人的 HLA分型 大多采用這一技術(shù)。 設(shè)計多循環(huán)反應(yīng)的程序，以使相連循環(huán)的退火溫度越來越低。由于開始時的退火溫度選擇為高于估計的Tm值，隨著循環(huán)的進行，退火溫度逐漸降到Tm值，并最終低于這個水平，用于確保第一個引物—模板雜交事件發(fā)生在最互補的反應(yīng)物之間，即那些產(chǎn)生目的擴增產(chǎn)物的反應(yīng)物之間。盡管退火溫度最終會降到非特異雜交的Tm值，但此時目的擴增產(chǎn)物已開始幾何擴增，在剩下的循環(huán)中處于超過任何滯后（非特異）PCR產(chǎn)物的地位。 說白了就是先提高退火溫度，將目的片段擴增出來，然后逐漸降低退火溫度，這樣做的好處就是能夠減少非特異性條帶的擴增。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
18樓2013-03-22 15:47:16
19樓2013-03-22 20:25:43
21樓2013-03-22 23:40:55
22樓2013-03-23 17:09:53
23樓2013-03-26 13:13:09
28樓2013-03-26 15:46:45
29樓2014-12-21 20:57:25
30樓2014-12-21 20:58:47
簡單回復(fù)
2013-03-20 16:50
回復(fù)
星星楊(金幣+1): 謝謝參與
2013-03-20 17:12
回復(fù)
2013-03-20 17:22
回復(fù)
wgatssd8樓
2013-03-21 07:34
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孫兵11樓
2013-03-21 10:43
回復(fù)
星星楊16樓
2013-03-22 08:37
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licong952720樓
2013-03-22 20:43
回復(fù)
cgcgx24樓
2013-03-26 13:23
回復(fù)
血色狼漫25樓
2013-03-26 13:24
回復(fù)
祝福 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ]
haya051326樓
2013-03-26 13:27
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