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數(shù)峰青1989鐵蟲 (小有名氣)
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5'race 沒(méi)有結(jié)果，求高人指點(diǎn)
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近一段時(shí)間在用takara的試劑盒做5'race，但是第二次PCR之后怎么也得不到一個(gè)清晰的條帶。。。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如所附圖，請(qǐng)高人指點(diǎn)一二 RNA分離結(jié)果（該結(jié)果說(shuō)明rna提取很成功，可以做下一步實(shí)驗(yàn)）.jpg 2次PCR之后產(chǎn)物電泳結(jié)果（沒(méi)有條帶，原因是什么，請(qǐng)高人指點(diǎn)）.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:15:43
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:15:43
| there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to design my primer, there are other primers design software you can choose. after this try different annealing temperature, sometimes you can add DMSO if the template is GC-rich. At the same time, give it enough extention time. If your target gene is rare, you can also try the nested PCR. |
3樓2013-03-27 02:02:13
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6樓2013-03-29 21:06:12
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