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數(shù)峰青1989鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
5'race 沒有結(jié)果，求高人指點
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近一段時間在用takara的試劑盒做5'race，但是第二次PCR之后怎么也得不到一個清晰的條帶。。。實驗結(jié)果如所附圖，請高人指點一二 RNA分離結(jié)果（該結(jié)果說明rna提取很成功，可以做下一步實驗）.jpg 2次PCR之后產(chǎn)物電泳結(jié)果（沒有條帶，原因是什么，請高人指點）.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:15:43
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2013-03-29 16:03:31
gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:15:43
| there are so many reasons such as the quality of the cDNA library, annealing temperature, primer specificity,elongation time. I guess you may need check them one by one. I usually use primer 5 to design my primer, there are other primers design software you can choose. after this try different annealing temperature, sometimes you can add DMSO if the template is GC-rich. At the same time, give it enough extention time. If your target gene is rare, you can also try the nested PCR. |
3樓2013-03-27 02:02:13
數(shù)峰青1989
鐵蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 植物生理與生化
2樓2013-03-26 21:35:02
數(shù)峰青1989
鐵蟲 (小有名氣)
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4樓2013-03-29 15:28:52
platanus
木蟲 (著名寫手)
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5樓2013-03-29 17:32:11
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