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dgge最后一次分離切膠后用不帶GC夾子引物擴(kuò)增不出目的條帶
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又來請(qǐng)教大家了。如題還是PCR擴(kuò)增不出,之前用于做DGGE的pcr用B968F-GC和B1401R效果很好,長度不到500bp,現(xiàn)在切完膠要測(cè)序了,用B968F擴(kuò)不出來了,它與B968F-GC的序列是一樣的啊,為什么出不來呢????? 我試了做引物濃度梯度,模板濃度梯度,退火溫度梯度,降落PCR也試過了,都不行,不帶GC夾的引物幾乎都擴(kuò)出來了。 今天用DNA模板做不帶GC夾子引物的擴(kuò)增也出不來,我就搞不明白了,引物序列是一樣的,怎么這就結(jié)合不上去了。 大家快幫我分析分析吧~~~~或者給我推薦幾篇文獻(xiàn)也好!跪謝啊。。! |
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