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zs416鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR小白，請(qǐng)教個(gè)關(guān)于NCBI的問題
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| PCR小白一枚，不會(huì)設(shè)計(jì)引物，想在NCBI上找個(gè)文章中的現(xiàn)成引物。已經(jīng)在NCBI上找到該基因了，但是，不知道怎么由基因的同源序列那里反過去查文章，請(qǐng)高手們教教我。 |
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- PCR測(cè)序結(jié)果出來后怎樣在NCBI上進(jìn)行比對(duì)？求各位高手幫忙！
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liyu0355
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2樓2013-03-30 18:53:37
zs416
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3樓2013-04-01 23:06:11
liyu0355
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4樓2013-04-02 10:50:40
奇怪人生123
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5樓2013-04-02 16:39:17
意孤城_
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-31 16:54:20
gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:54:37
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-31 16:54:37
| 關(guān)于引物設(shè)計(jì) 很多人都選擇使用軟件什么的 那肯定會(huì)很好。從我們實(shí)驗(yàn)室來講 從來不使用（除了一些特殊的PCR外）我們?cè)O(shè)計(jì)引物真的很隨意的 就在你的目的基因的上下游隨機(jī)取上18-20bp的序列（如果是從基因組上擴(kuò)增就適當(dāng)在長一點(diǎn)），有需要酶切位點(diǎn)的加上再加上保護(hù)堿基（有時(shí)候就達(dá)到近30bp），有的時(shí)候上下游退火溫度相差很大，使用梯度或者Touchdown很隨意就p出目的條帶了，百試不爽。當(dāng)然可以注意一下3‘末端最后一個(gè)堿基避免T |
6樓2013-04-02 20:46:21
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