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koko8001新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助已知mRNA序列及蛋白序列，如何獲得蛋白
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求助各位，最近在植物上找到一個(gè)感興趣的蛋白，想要獲得該蛋白來進(jìn)行下一步研究，已經(jīng)查到了蛋白的序列以及mRNA的序列，如何獲得該蛋白？望步驟詳細(xì)些，本人是新手 |
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凌波麗
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 - MolEPI: 44
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
3樓2013-04-20 14:36:53
凌波麗
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2樓2013-04-20 14:35:54
【答案】應(yīng)助回帖
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koko8001(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 21:53:18
gyesang: 回帖置頂 2013-05-04 01:49:01
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-04 01:49:01
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1.先確定在植物哪個(gè)組織中表達(dá)該蛋白； 2.在對(duì)應(yīng)組織中（比如葉片）提取總RNA; 3.反轉(zhuǎn)錄成cDNA(可用反轉(zhuǎn)錄試劑盒）； 4.設(shè)計(jì)引物（該蛋白mRNA序列的開放閱讀框上游和下游區(qū)）包含構(gòu)建載體的酶切位點(diǎn)； 5.PCR； 6.PCR產(chǎn)物回收并測(cè)序； 7.正確測(cè)序結(jié)果的片段構(gòu)建至表達(dá)載體； 8.構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，表達(dá)成蛋白 |
4樓2013-05-02 21:44:25
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