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koko8001新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助已知mRNA序列及蛋白序列,如何獲得蛋白
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求助各位,最近在植物上找到一個(gè)感興趣的蛋白,想要獲得該蛋白來(lái)進(jìn)行下一步研究,已經(jīng)查到了蛋白的序列以及mRNA的序列,如何獲得該蛋白?望步驟詳細(xì)些,本人是新手![]() ![]() |
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1.先確定在植物哪個(gè)組織中表達(dá)該蛋白; 2.在對(duì)應(yīng)組織中(比如葉片)提取總RNA; 3.反轉(zhuǎn)錄成cDNA(可用反轉(zhuǎn)錄試劑盒); 4.設(shè)計(jì)引物(該蛋白mRNA序列的開放閱讀框上游和下游區(qū))包含構(gòu)建載體的酶切位點(diǎn); 5.PCR; 6.PCR產(chǎn)物回收并測(cè)序; 7.正確測(cè)序結(jié)果的片段構(gòu)建至表達(dá)載體; 8.構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌,表達(dá)成蛋白 |
專家顧問(wèn) (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
| 到基因文庫(kù)把完整的蛋白質(zhì)基因調(diào)出來(lái),然后獲取該蛋白質(zhì)的基因,導(dǎo)入載體,導(dǎo)入工程細(xì)胞,篩取陽(yáng)性克隆,大量表達(dá),收獲產(chǎn)物,分析結(jié)構(gòu)功能等。在轉(zhuǎn)錄水平,轉(zhuǎn)錄后水平,翻譯水平,翻譯后水平,蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)功能相互作用等若干角度都可以都可以研究。 |
專家顧問(wèn) (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
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