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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 質粒提取問題
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kueradi金蟲 (小有名氣)
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[求助]
質粒提取問題
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質粒p-EGFP-C3,DH5a菌。一直用碧云天的小量抽提質粒試劑盒，去年都挺好的，200-300ng/ul.今年再提就一直可低了，30-40ng/ul,運氣好60-90ng/ul. A260/A280也不到1.7.買了新的盒子還是這樣。質粒重新轉化，抽提還是這樣。大家有沒有遇到過這種情況呀，什么原因呀呀。著急呀。 菌液都是過夜搖菌，12h. 每次4ml合一管提。沉積的菌量還合適著。操作都可注意了。急呀，什么原因呀。 |
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2樓2013-04-01 14:49:42
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4樓2013-04-01 15:07:36
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| 一般試劑盒提質粒效果都很好的，還是以菌為主排除因素。首先，菌液過一兩個月后不要直接搖菌，最好是劃平板活化，挑取單克隆搖菌，菌的活性高。其次，以經(jīng)驗來說搖菌15個小時比較好，提取的質粒濃度能高。再次，你質粒重新轉化所用的質粒濃度怎么樣？一般質粒轉化出來得菌都是很好的，檢查下抗生素是否加的有點多，加多會影響菌的生長，搖菌提質粒結果不好。最后，實在不行就換試劑盒唄 |
5樓2013-04-01 15:44:45
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