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細(xì)胞周期問題
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看了很多關(guān)于細(xì)胞周期的做法 我想請教各位 1、細(xì)胞消化要理想，資料顯示最好消化時加EDTA，可使流式做的很漂亮； 2、細(xì)胞消化后不可吹打過度，減少細(xì)胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的細(xì)胞容易破碎； 3、 細(xì)胞用PBS洗滌離心，轉(zhuǎn)速不超過1000r/min，有文獻(xiàn)用800r/min；可考慮在此過程中用300目的尼龍網(wǎng)過濾一遍細(xì)胞（有人主張用鋼網(wǎng)，以 減少細(xì)胞與尼龍網(wǎng)粘連的損失，本人認(rèn)為鋼網(wǎng)易損傷細(xì)胞，DNA外溢也會造成細(xì)胞粘連，所以在細(xì)胞數(shù)足夠的情況下，首選尼龍網(wǎng)）； 4、離心后的固定，標(biāo)準(zhǔn)做法是將細(xì)胞懸液加入預(yù)冷70％酒精，而不是向細(xì)胞中加酒精，這樣是為了減少細(xì)胞聚集，這一點很重要，很多人都忽視了！ 第四步驟中的 細(xì)胞懸液用什么吹打成懸液的呢？？ 70％酒精還是啥呢？？？？ |
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 分子生化實驗經(jīng)驗積累 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+1, 鼓勵交流！ 2013-04-02 19:40:20
7782663: 金幣+1 2013-04-04 14:15:18
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| 樓主不用擔(dān)心，細(xì)胞周期是非常簡單的實驗，只要你的細(xì)胞正常，流式細(xì)胞儀也正常，基本上怎么做都能出結(jié)果的。70%乙醇是用來固定細(xì)胞的，讓細(xì)胞停止在你固定的那個時候的周期。吹打成懸液的方法是，你離心倒掉上清再把管子正過來時底下肯定有剩余的PBS，用手磕勻就行了，就和你傳細(xì)胞時離心管里細(xì)胞敲勻是一樣的。 |
2樓2013-04-02 16:29:39
3樓2013-04-04 14:14:59
4樓2013-04-04 19:08:31
5樓2013-04-08 08:33:31
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