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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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weiyuqiao

木蟲 (初入文壇)

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[求助] 感受態(tài)的制備

如果我想做基因的過表達(dá)，目的片段與載體連接好想導(dǎo)入工程菌，那么這個(gè)工程菌是不是應(yīng)該先做成感受態(tài)，求醋酸菌（巴氏醋桿菌和木醋桿菌）的感受態(tài)細(xì)胞制作方法，如果有相關(guān)文獻(xiàn)就更好了。實(shí)驗(yàn)新手，請(qǐng)大家多多幫助！謝謝！

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1樓 2013-04-10 10:39:18

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

cherish_216

新蟲 (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
weiyuqiao: 金幣+2, ★有幫助 2013-04-19 16:12:49

感受態(tài)細(xì)胞可以分為：一般感受態(tài)細(xì)胞和超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞，后者制備起來更復(fù)雜一點(diǎn)。我做的是一般大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備，但感受態(tài)細(xì)胞制備的基本步驟應(yīng)該都是差不多的。這是我的方法，你可以參考下：
1、菌株的活化培養(yǎng)，當(dāng)OD600=0.6（對(duì)數(shù)期）
2、取10ml菌液加入無菌離心管中，冰浴10min
3、4℃，4000rpm，離心10min，棄上清
4、在冰浴上，向離心管中加入10ml 4℃預(yù)冷的0.1M CaCl2，充分混勻，冰浴30min
5、4℃，4000rpm，離心10min，棄上清
6、在冰浴上，向離心管中加入10ml 4℃預(yù)冷的0.1M CaCl2，充分混勻（動(dòng)作要輕，不可劇烈混勻），冰浴30min
7、4℃，4000rpm，離心10min，棄上清
8、在冰浴上，向離心管中加入2ml 4℃預(yù)冷的0.1M CaCl2，充分混勻（動(dòng)作要輕，不可劇烈混勻）
9、將制備好的感受態(tài)細(xì)胞分裝于1.5ml 的EP管中，每管200ul。
上述感受態(tài)細(xì)胞可直接用于轉(zhuǎn)化，若當(dāng)天不用，可在其中加入甘油（終濃度為20%），于-70℃保存，可保存2年左右。

注：整個(gè)過程應(yīng)該在無菌條件下進(jìn)行；
其中0.1M CaCl2配制好后，要用0.45um濾膜過濾除菌

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