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[求助]
細胞凋亡流氏檢測中PI工作液的配置
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| 要做細胞凋亡的流式檢測，買的PI是粉末，不太清楚PI該怎樣配置，在網(wǎng)上查了一下，有很多種方法看的更迷糊了，所以想求助一下大神，用于流式檢測的PI工作液濃度是多少，怎樣配置，實驗的時候每個樣用量是多少？，麻煩大家了，不勝感激~ |
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cdl007
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+5, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2013-04-11 20:38:18
amisking: 回帖置頂 2013-04-11 20:38:20
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PI染液：將PI溶于PBS（pH7.4）中，終濃度為100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 實驗步驟 1. 收集細胞｛數(shù)目約（1~ 5）×106個/mL｝，500 ~ 1000 r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。 2. 3ml PBS洗滌1次。 3. 離心去PBS，加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小時。 4. 離心棄去固定液，3mlPBS重懸5min。 5. 400目的篩網(wǎng)過濾1次，500—1000r/min離心5min，棄去PBS。 6. 用1ml PI染液染色，4℃避光30min。 7. 流式細胞儀檢測：PI用氬離子激發(fā)熒光，激光光波波長為488nm，發(fā)射光波波長大于630nm，產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強度的直方圖也可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖。 |
3樓2013-04-11 17:15:44
xhds5
鐵蟲 (初入文壇)
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bmelzc2005
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求大神解釋，我對這個也不太懂，最近也打算做的。 6樓2013-04-26 20:54:09
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