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[求助]
細(xì)胞凋亡流氏檢測(cè)中PI工作液的配置
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| 要做細(xì)胞凋亡的流式檢測(cè),買的PI是粉末,不太清楚PI該怎樣配置,在網(wǎng)上查了一下,有很多種方法看的更迷糊了,所以想求助一下大神,用于流式檢測(cè)的PI工作液濃度是多少,怎樣配置,實(shí)驗(yàn)的時(shí)候每個(gè)樣用量是多少?,麻煩大家了,不勝感激~ |
鐵蟲 (初入文壇)
木蟲 (正式寫手)
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PI染液:將PI溶于PBS(pH7.4)中,終濃度為100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 實(shí)驗(yàn)步驟 1. 收集細(xì)胞{數(shù)目約(1~ 5)×106個(gè)/mL},500 ~ 1000 r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。 2. 3ml PBS洗滌1次。 3. 離心去PBS,加入冰預(yù)冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小時(shí)。 4. 離心棄去固定液,3mlPBS重懸5min。 5. 400目的篩網(wǎng)過濾1次,500—1000r/min離心5min,棄去PBS。 6. 用1ml PI染液染色,4℃避光30min。 7. 流式細(xì)胞儀檢測(cè):PI用氬離子激發(fā)熒光,激光光波波長(zhǎng)為488nm,發(fā)射光波波長(zhǎng)大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強(qiáng)度的直方圖也可分析前散射光對(duì)側(cè)散射光的散點(diǎn)圖。 |
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