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糖小串銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
急求進(jìn)樣后HPLC柱壓升高的原因！！
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| 本人在做一個(gè)抗癌藥物的分析，發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣時(shí)進(jìn)一針，柱壓便升高1~2MPa,分析條件是：diol二醇基色譜柱（非新柱子）,流動(dòng)相乙腈：水=92：8，流速1ml/min,柱溫30度，情況是這樣，之前柱子是正用，分析了幾天后柱壓增加顯著，有些堵了，由于實(shí)驗(yàn)緊急，就先反過來用了。沖柱子的順序是進(jìn)樣前純乙腈--70%乙腈---流動(dòng)相（92%乙腈），反用后沖乙腈的柱壓是3.8mpa,沖70%乙腈是6.8mpa,92%乙腈是4.2.mpa,進(jìn)樣后的柱壓情況是 進(jìn)了一針柱壓變?yōu)?.2mpa,進(jìn)了兩針變?yōu)?.7mpa,進(jìn)了第三針就變成了10mpa，不敢進(jìn)了，怕柱子反用也廢掉。這是為什么呢？1我的樣品是過膜后稀釋的，并且用流動(dòng)相稀釋應(yīng)該也不會(huì)出現(xiàn)進(jìn)樣后晶體析出的現(xiàn)象，別人用這個(gè)機(jī)器的時(shí)候顯示正常，這是柱子自身的問題呢？還是我的操作哪里有不對(duì)的地方？請(qǐng)各位前輩多多指教，不勝感激��！還想問一下，如果反用了柱子還能再正用嗎？ |
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mada1986
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| 只怕是已經(jīng)廢掉了，柱子不是簡(jiǎn)單的正反都一樣，正面進(jìn)樣的部分有分散器，保證你的流動(dòng)相均勻的分布在柱床上，柱子的出口可沒有這么一個(gè)裝置，而且反過來用，可能會(huì)導(dǎo)致分散器被堵住， 而且破壞柱床的分布，導(dǎo)致柱效急劇下降，總而言之是相當(dāng)?shù)臍е�。前期的柱壓急劇上升有可能是進(jìn)樣器有臟東西，因?yàn)檫@個(gè)部分很容易被忽略，也不經(jīng)常清洗。還有柱壓明顯上升的時(shí)候可以采用純水-純乙腈交替沖洗，同時(shí)提高柱溫的方法，洗個(gè)1-2個(gè)小時(shí)。反用過的柱子還能不能正常使用基本就看你造化了 |
糖小串5樓2013-04-17 14:13:17
糖小串
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