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shiysh木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于免疫組化（IHC）的問題
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| 前幾天做IHC，用的一抗分別抗小鼠和抗兔的，各五個抗體。結(jié)果小鼠的抗體全都沒有表達，兔子的全部表達了。理論上應(yīng)該是無論是抗小鼠還是抗兔都表達的。因為是之前的block，從新切的片，本來是打算拿來做positive control的。剛開始以為是二抗出了問題，今天換了一個kit，發(fā)現(xiàn)依舊是小鼠的抗體都不表達，兔子的都表達。感覺很是詭異。請問各位大俠是什么原因？ |
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凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, MolEPI+1, 應(yīng)助指數(shù)+1, 贈人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊�？鞓访恳惶� 2013-04-21 16:08:53
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shiysh: 金幣+15, ★★★很有幫助 2013-04-22 01:43:39
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這個問題可能是與影響抗原免疫應(yīng)答的因素有關(guān)： 包括抗原分子的理化因素、的宿主因素和抗原進入動物機體的方式三方面。 1.抗原分子的理化因素 化學(xué)性質(zhì)、分子質(zhì)量大小、結(jié)構(gòu)復(fù)雜性、易接近型、聚合狀態(tài)還是單體狀態(tài)。 2.宿主因素 （1）遺傳因素：各種物種的不同，同一物種不同個體，對同一抗原的免疫應(yīng)答與是否免疫應(yīng)答的程度不同。而且在各種遺傳因素中，NHC是涉及到免疫應(yīng)答的質(zhì)和量的最主要因素。 （2）同一物種不同個體的年齡、性別與健康狀況也對免疫應(yīng)答的質(zhì)和量有影響。一般地，青壯年動物對免疫應(yīng)答的質(zhì)和量高，雌性動物比雄性動物生成的抗體多。 3.抗原進入動物機體的方式 （1）抗原進入動物機體的數(shù)量：抗原的劑量要適中，劑量太高或者太低都會誘導(dǎo)免疫耐受。 （2）免疫途徑：按免疫應(yīng)答強度從高到低，皮內(nèi)免疫>皮下免疫>腹腔注射=靜脈注射。 （3）兩次免疫之間的時間間隔和次數(shù)。 （4）使用免疫佐劑：弗氏試劑誘導(dǎo)IgG類抗體產(chǎn)生；明礬試劑誘導(dǎo)IgE類抗體產(chǎn)生。 這些原理你可以參考，然后調(diào)整你的protocols. Good Luck ! |
2樓2013-04-21 14:43:46
凌波麗
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