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shiysh木蟲 (小有名氣)
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關(guān)于免疫組化（IHC）的問(wèn)題
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| 前幾天做IHC，用的一抗分別抗小鼠和抗兔的，各五個(gè)抗體。結(jié)果小鼠的抗體全都沒(méi)有表達(dá)，兔子的全部表達(dá)了。理論上應(yīng)該是無(wú)論是抗小鼠還是抗兔都表達(dá)的。因?yàn)槭侵暗腷lock，從新切的片，本來(lái)是打算拿來(lái)做positive control的。剛開(kāi)始以為是二抗出了問(wèn)題，今天換了一個(gè)kit，發(fā)現(xiàn)依舊是小鼠的抗體都不表達(dá)，兔子的都表達(dá)。感覺(jué)很是詭異。請(qǐng)問(wèn)各位大俠是什么原因？ |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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這個(gè)問(wèn)題可能是與影響抗原免疫應(yīng)答的因素有關(guān)： 包括抗原分子的理化因素、的宿主因素和抗原進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體的方式三方面。 1.抗原分子的理化因素 化學(xué)性質(zhì)、分子質(zhì)量大小、結(jié)構(gòu)復(fù)雜性、易接近型、聚合狀態(tài)還是單體狀態(tài)。 2.宿主因素 （1）遺傳因素：各種物種的不同，同一物種不同個(gè)體，對(duì)同一抗原的免疫應(yīng)答與是否免疫應(yīng)答的程度不同。而且在各種遺傳因素中，NHC是涉及到免疫應(yīng)答的質(zhì)和量的最主要因素。 （2）同一物種不同個(gè)體的年齡、性別與健康狀況也對(duì)免疫應(yīng)答的質(zhì)和量有影響。一般地，青壯年動(dòng)物對(duì)免疫應(yīng)答的質(zhì)和量高，雌性動(dòng)物比雄性動(dòng)物生成的抗體多。 3.抗原進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體的方式 （1）抗原進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體的數(shù)量：抗原的劑量要適中，劑量太高或者太低都會(huì)誘導(dǎo)免疫耐受。 （2）免疫途徑：按免疫應(yīng)答強(qiáng)度從高到低，皮內(nèi)免疫>皮下免疫>腹腔注射=靜脈注射。 （3）兩次免疫之間的時(shí)間間隔和次數(shù)。 （4）使用免疫佐劑：弗氏試劑誘導(dǎo)IgG類抗體產(chǎn)生；明礬試劑誘導(dǎo)IgE類抗體產(chǎn)生。 這些原理你可以參考，然后調(diào)整你的protocols. Good Luck ! |
2樓2013-04-21 14:43:46
凌波麗
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