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[求助]
關(guān)于稀釋平板計數(shù)法的疑問
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1.我用的澆注法，應(yīng)該24h計數(shù)還是48h計數(shù)？ 2.長了24h后培養(yǎng)基表面的菌落很明顯，但是培養(yǎng)基內(nèi)部的菌就是一個小點點，很難看到，稀釋倍數(shù)低的平板像是10倍100倍1000倍幾乎全部都是一個點一個點大片大片的挺均勻根本看不清。這時該怎么計數(shù)呢？稀釋度高的培養(yǎng)基內(nèi)部也有一些點點，是表面和內(nèi)部的都記上去嗎？ 3.我一共做了7個梯度的十倍稀釋。原菌液倒平板之前的OD是1.13了，稀釋十倍之后變成0.13，稀釋100倍是0.01，1000居然變成0了，后面的稀釋度也是0左右。那這么看來菌液里的菌很少很少很少了，可是為什么平板計數(shù)后后面OD值是0的菌長出來的菌落還挺多啊，不數(shù)那些點點就差不多在30-300之間，數(shù)了差不多1000以上了。。。。 不懂怎么計數(shù)。我是想做一個CFU與OD之間關(guān)系的曲線來著。 是不是該等平板培養(yǎng)一段時間的同時要將相應(yīng)稀釋倍數(shù)的菌同等條件培養(yǎng)呢？是不是菌在平板里擴大培養(yǎng)了所以之前測的OD值是不對的？ [ Last edited by 襄陽蓉兒 on 2013-4-28 at 11:46 ] |
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關(guān)于第一個問題，24小時應(yīng)該就可以了，時間太長菌落數(shù)就難以確定了，后期就都長在一起了，而且后期也有抑制作用了 第二個問題其實都做幾個平行試驗就可以了，不用計數(shù)稀釋度低的吧，只要把稀釋到最后的菌落數(shù)合適的那個梯度多做幾個平行試驗不就可以倒推回原菌落數(shù)嗎 第三個問題可能你的操作不當(dāng)，在空氣中就染菌了，是在酒精燈范圍內(nèi)操作的嗎？應(yīng)在酒精的火焰周圍15厘米的范圍內(nèi)操作才可以保證不染菌。 希望能幫到你啊 |
2樓2013-04-28 13:59:48
zjm104273
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1、你培養(yǎng)的是什么微生物?計數(shù)一般選擇對數(shù)生長期，例如大腸桿菌通常24小時左右就可以進行菌落計數(shù)了。 2. 菌落計數(shù)應(yīng)該是所有菌落均做統(tǒng)計，如果你覺得通過澆注法內(nèi)部與表面有干擾，可考慮通過涂布的方法計數(shù)。計數(shù)時不是平板上長多少就計多少的，菌液濃度越大，幾個細胞長出一個菌落，或者甚至菌落連成菌苔，根本沒法計數(shù)，即使數(shù)出來也不準確，我們通常對于一個樣品會選擇幾個不同的稀釋度，涂平板以后，選擇生長菌落數(shù)在30-200左右的平板計數(shù)，然后再乘以稀釋倍數(shù)得到原始樣品的濃度，菌落數(shù)太多計數(shù)值偏小，菌落數(shù)太少隨機性太大，很不準確。 3、你討論濃度和OD值關(guān)系的時應(yīng)選擇一定范圍，不是從0開始，大概10的5次方到8次方左右吧，濃度低的話OD值肯定趨近與0的，濃度太高的話兩者關(guān)系不再近乎線性。。 |
6樓2013-04-29 19:01:16
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3樓2013-04-28 14:30:57
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10樓2013-05-02 10:37:26
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