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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 存檔舊帖 » cDNA凝膠電泳結果分析
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[交流]
cDNA凝膠電泳結果分析
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這是我的cDNA PCR結果，麻煩大家?guī)兔Ψ治鲆幌�，因為我們實驗室�(guī)缀醪簧婕斑@一塊，我也是偶然做這一部分。從人肝癌細胞中提取的RNA，然后經(jīng)RT-PCR，逆轉錄成cDNA。電泳我用的是1.5%瓊脂糖，1*TBE，65V，90min，每孔10μl左邊兩個是RNA，中間是1kb mark，右邊兩個是pcr產(chǎn)物，有專業(yè)人士能看一下這是否p成功了嗎？ RNA,DNA.jpg |
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-02 12:06:14
foxhuli(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 熱心的蟲子，忠言逆耳！ 2013-05-02 12:06:56
foxhuli: 金幣+2 2013-05-02 20:57:44
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foxhuli: 金幣+2 2013-05-02 20:57:44
| 首先，絕大多數(shù)人看電泳圖都是點樣孔在上邊，偶爾有人這樣放的。這就是另類。其次，要讓人看明白電泳圖，必須使用圖片處理軟件將每個電泳孔都標注清楚了。下面我來說說關于cDNA問題：一般情況下，要檢驗RNA提取結果如何，好的RNA是明顯的兩條帶，28s和18s，大小分別在1900bp和1000bp左右，28s條帶亮度是18s條帶亮度的1-2倍，這樣的RNA才是好的，才可以用來做cDNA。再者，要檢測cDNA質量也行，cDNA合成試劑盒一般情況下都會給對照mRNA，合成cDNA過程中，一起做這個對照，它的產(chǎn)物是一條1400bp的條帶（takara試劑盒是這樣的），電泳檢測時，如果對照出現(xiàn)了1400bp條帶，說明你整個cDNA反轉錄過程是沒有問題的。正式樣品的條帶，就應該看你使用的是什么引物了，如果是試劑盒給的olig引物，產(chǎn)物是彌散的條帶，沒有特異條帶。如果你使用的是特異引物，也就是你自己合成的目的基因的引物，那產(chǎn)物就是一條帶，多了不對。從圖中看，RNA提取就是問題，跟不用說后面實驗了。 |
9樓2013-05-02 10:03:14
10樓2013-05-02 10:09:36
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2013-05-01 22:27
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