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zhuqinjian金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
SaII和BamHI雙酶切切不開(kāi)
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| 我用T載體與目的片段連接后，導(dǎo)入JM109中，用菌落PCR也能P出目的片段，提取質(zhì)粒后PCR也能P出來(lái)，電泳跑出來(lái)的片段也正確（環(huán)狀片段跑出來(lái)有3條帶），但是用SaII和BamHI雙酶切就是切不出來(lái)，只有一條帶。求大神指導(dǎo)啊？是不是只是單酶切了��？為啥雙酶切切不出來(lái)呢？ |
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zhuqinjian
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15樓2013-05-07 22:07:35
stevenshi021
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zhuqinjian: 金幣+5, ★有幫助, 單酶切做了下，發(fā)現(xiàn)Sal I沒(méi)有切開(kāi)，哎不知道怎么回事 2013-05-02 11:01:09
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 12:01:23
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zhuqinjian: 金幣+5, ★有幫助, 單酶切做了下，發(fā)現(xiàn)Sal I沒(méi)有切開(kāi)，哎不知道怎么回事 2013-05-02 11:01:09
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 12:01:23
| 分別做單切，確定是那個(gè)酶不能工作！此外，PCR的鑒定時(shí)候是否有加入陰性與陽(yáng)性對(duì)照，我想擔(dān)心你所看到的片段是都就是目的片段！希望對(duì)你有用！ |
2樓2013-05-02 10:20:52
dafeizizhu
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhuqinjian: 金幣+3, ★有幫助, 我是用捷瑞的試劑盒提的質(zhì)粒，我覺(jué)得應(yīng)該不是這個(gè)問(wèn)題吧 2013-05-02 11:02:21
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zhuqinjian: 金幣+3, ★有幫助, 我是用捷瑞的試劑盒提的質(zhì)粒，我覺(jué)得應(yīng)該不是這個(gè)問(wèn)題吧 2013-05-02 11:02:21
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 12:01:31
| 酶切之前，樣品質(zhì)粒要進(jìn)行除酶，除鹽，除乙醇等處理。一般就是酚氯仿抽提，技術(shù)要過(guò)關(guān)，不要在后面醇沉?xí)r留下太多的乙醇。上面說(shuō)的單酶切驗(yàn)證酶是否失效是可行的，但是樣品必須干凈。內(nèi)切酶很受離子和乙醇等物質(zhì)影響的。 |
3樓2013-05-02 10:50:02
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4樓2013-05-02 11:01:08
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