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zhuqinjian金蟲 (小有名氣)
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[求助]
SaII和BamHI雙酶切切不開
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| 我用T載體與目的片段連接后，導(dǎo)入JM109中，用菌落PCR也能P出目的片段，提取質(zhì)粒后PCR也能P出來，電泳跑出來的片段也正確（環(huán)狀片段跑出來有3條帶），但是用SaII和BamHI雙酶切就是切不出來，只有一條帶。求大神指導(dǎo)啊？是不是只是單酶切了�。繛樯峨p酶切切不出來呢？ |
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gongeleven
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4樓2013-05-02 11:01:08
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhuqinjian(gyesang代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！SalI確實(shí)不好用，不管是哪個(gè)公司的！ 2013-05-03 20:22:59
gyesang: 回帖置頂 2013-05-03 20:23:11
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-03 20:23:11
| SalI 這個(gè)酶感覺活性不如其他酶。 可能你的DNA里面有些雜質(zhì)，抑制了SalI的活性。我曾經(jīng)遇到過這樣的情況，做了幾個(gè)miniprep, 用bamHI 和 XhoI 都能切開，用SalI 時(shí)有的能全部切開，有時(shí)只有很微弱的帶子，有的壓根切不開。如果你非要用SalI，建議你先做下乙醇沉淀 （記得要加糖原），這樣DNA會(huì)比較干凈，比較容易被切開。 |
7樓2013-05-03 06:40:07
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13樓2013-05-07 09:18:41
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zhuqinjian: 金幣+3, ★有幫助, 我是用捷瑞的試劑盒提的質(zhì)粒，我覺得應(yīng)該不是這個(gè)問題吧 2013-05-02 11:02:21
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| 酶切之前，樣品質(zhì)粒要進(jìn)行除酶，除鹽，除乙醇等處理。一般就是酚氯仿抽提，技術(shù)要過關(guān)，不要在后面醇沉?xí)r留下太多的乙醇。上面說的單酶切驗(yàn)證酶是否失效是可行的，但是樣品必須干凈。內(nèi)切酶很受離子和乙醇等物質(zhì)影響的。 |
3樓2013-05-02 10:50:02
gyesang
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5樓2013-05-02 12:02:56
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zhuqinjian
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