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zhuqinjian金蟲 (小有名氣)
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[求助]
SaII和BamHI雙酶切切不開
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| 我用T載體與目的片段連接后，導(dǎo)入JM109中，用菌落PCR也能P出目的片段，提取質(zhì)粒后PCR也能P出來，電泳跑出來的片段也正確（環(huán)狀片段跑出來有3條帶），但是用SaII和BamHI雙酶切就是切不出來，只有一條帶。求大神指導(dǎo)啊？是不是只是單酶切了��？為啥雙酶切切不出來呢？ |
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zhuqinjian(gyesang代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 21:55:11
zhuqinjian: 金幣+2, ★有幫助, 應(yīng)該不是這個(gè)原因，因?yàn)橘|(zhì)粒條帶很亮 2013-05-03 09:11:13
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6樓2013-05-02 21:16:10
stevenshi021
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2樓2013-05-02 10:20:52
dafeizizhu
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhuqinjian: 金幣+3, ★有幫助, 我是用捷瑞的試劑盒提的質(zhì)粒，我覺得應(yīng)該不是這個(gè)問題吧 2013-05-02 11:02:21
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| 酶切之前，樣品質(zhì)粒要進(jìn)行除酶，除鹽，除乙醇等處理。一般就是酚氯仿抽提，技術(shù)要過關(guān)，不要在后面醇沉?xí)r留下太多的乙醇。上面說的單酶切驗(yàn)證酶是否失效是可行的，但是樣品必須干凈。內(nèi)切酶很受離子和乙醇等物質(zhì)影響的。 |
3樓2013-05-02 10:50:02
gongeleven
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4樓2013-05-02 11:01:08
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