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zhuqinjian金蟲 (小有名氣)
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[求助]
SaII和BamHI雙酶切切不開
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| 我用T載體與目的片段連接后，導(dǎo)入JM109中，用菌落PCR也能P出目的片段，提取質(zhì)粒后PCR也能P出來，電泳跑出來的片段也正確（環(huán)狀片段跑出來有3條帶），但是用SaII和BamHI雙酶切就是切不出來，只有一條帶。求大神指導(dǎo)�。渴遣皇侵皇菃蚊盖辛税�？為啥雙酶切切不出來呢？ |
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dafeizizhu
銅蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhuqinjian: 金幣+3, ★有幫助, 我是用捷瑞的試劑盒提的質(zhì)粒，我覺得應(yīng)該不是這個問題吧 2013-05-02 11:02:21
gyesang: 金幣+1, 鼓勵回帖應(yīng)助！ 2013-05-02 12:01:31
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| 酶切之前，樣品質(zhì)粒要進行除酶，除鹽，除乙醇等處理。一般就是酚氯仿抽提，技術(shù)要過關(guān)，不要在后面醇沉?xí)r留下太多的乙醇。上面說的單酶切驗證酶是否失效是可行的，但是樣品必須干凈。內(nèi)切酶很受離子和乙醇等物質(zhì)影響的。 |
3樓2013-05-02 10:50:02
stevenshi021
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5樓2013-05-02 12:02:56
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