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jessica_nn

銅蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 關(guān)于SDS-PAGE電泳的問(wèn)題

SDS-PAGE電泳跑成這樣是什么原因？12%的濃縮膠和5%的分離膠，濃縮膠電壓85V，分離膠電壓120V，恒壓的情況下，電流一直很低，大概在22-15A，而且樣品是在濃縮膠和分離膠的分界面才壓成一條線(xiàn)的，如圖。請(qǐng)高手賜教！
這個(gè)是染色后的膠

進(jìn)入分離膠之前

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1樓 2013-05-03 21:13:24

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上陌

新蟲(chóng) (初入文壇)

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wizardfan: 金幣+2, 鼓勵(lì)新蟲(chóng)發(fā)帖，尤其是應(yīng)助 2013-05-06 08:34:31

感覺(jué)是樣品處理的問(wèn)題，是否充分變形，灌膠前膠有沒(méi)有混勻？

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5樓2013-05-05 20:46:04

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cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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wizardfan: 金幣+2, 謝謝分析，以后常來(lái) 2013-05-04 07:54:05
jessica_nn: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-07-09 19:48:20

樣品里含有較多鹽或者離子強(qiáng)度太大。也有可能是樣品變性處理不理想。

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2樓2013-05-04 00:39:37

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HTGe

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wizardfan: 金幣+2, 謝謝分析 2013-05-05 07:39:31

樣品沒(méi)處理好，首先是變性處理問(wèn)題（原因詳見(jiàn)SDS-PAGE原理）；另外，點(diǎn)樣沒(méi)點(diǎn)好，很明顯跑偏了呵呵；最后，濃縮膠也有問(wèn)題，沒(méi)有達(dá)到理想的濃縮效果；可以再參考下分子克隆或其它實(shí)驗(yàn)手冊(cè)。

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3樓2013-05-04 11:33:53

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huizhengliu

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感覺(jué)是樣品的問(wèn)題，變性時(shí)間可以加長(zhǎng)，另外，配膠的tris注意下pH值，膠混均勻了再倒，注意這些就沒(méi)問(wèn)題了

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4樓2013-05-04 14:51:01

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