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qlw4567鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關于蛋白質(zhì)多聚體檢測問題。
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| 如題，我現(xiàn)在做牛血清蛋白的分離試驗，但是在不同濃度下我認為它含有不同量的多聚體蛋白質(zhì)，有什么辦法能測出BSA溶液里面多聚體的含量，或者BSA單體的含量也行。 |
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qlw4567
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【答案】應助回帖
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qlw4567: 金幣+50, ★★★很有幫助, 謝謝您的幫助，雖然還有些疑問，但是金幣給您了。 2013-05-12 10:36:37
qlw4567: 金幣+50, ★★★很有幫助, 謝謝您的幫助，雖然還有些疑問，但是金幣給您了。 2013-05-12 10:36:37
| 是,你可以通過粒徑分布確定聚合體分布情況, 關于分子篩堵柱子是有這樣的風險，主要還是看你所謂的聚集是多大的粒徑了，如果小的話分子篩應該沒有問題。DSL好像不太存在這樣的堵塞柱子的問題。我突然想到還有一種粗糙的辦法就是走非變性膠（native-PAGE）,但是這種方法有時候不是很可信，還是前兩種方法比較靠譜。 |
6樓2013-05-12 07:14:05
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現(xiàn)用非變性的分子篩層析或者非變性凝膠電泳測定一下可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的相對分子量，非變性凝膠電泳可以測定蛋白質(zhì)的相對分子量，但有時不太準，因為還與蛋白質(zhì)的空間構象有關系。因為分子篩層析或者凝膠電泳測定一下可能的BSA（牛血清白蛋白的聚合體的相對分子量）多少都是BSA大致呈現(xiàn)倍數(shù)關系。所以可以測定出來。至于有人說：分子篩層析上樣聚合體會堵住層析柱，這是可能的，不過上樣前應該過濾除去不溶物，不然不僅分子篩層析會堵，非變性凝膠電泳照樣也走不動。這樣可以按測出來BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的相對分子量。要知道BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的在溶液中的含量，那么只要在非變性條件下，把可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合體按照不同聚合程度的相對分子量分離出來，然后用福林酚方法、紫外吸收法可以通過光譜檢測出來溶液中的蛋白質(zhì)的含量，另外也可以從層析柱的色譜峰的面積讀出蛋白質(zhì)的含量（有專門的積分儀器和軟件）。 具體可以參考： 1.呂憲禹 主編，蛋白質(zhì)純化實驗方案與應用，化學工業(yè)出版社，2010， http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126 2.汪正范 編著，色譜定性與定量，化學工業(yè)出版社，2000. http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6427417 |
7樓2014-08-24 16:38:49
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9樓2014-08-25 07:26:34
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