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qlw4567鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[求助]
關(guān)于蛋白質(zhì)多聚體檢測問題。
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| 如題，我現(xiàn)在做牛血清蛋白的分離試驗(yàn)，但是在不同濃度下我認(rèn)為它含有不同量的多聚體蛋白質(zhì)，有什么辦法能測出BSA溶液里面多聚體的含量，或者BSA單體的含量也行。 |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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現(xiàn)用非變性的分子篩層析或者非變性凝膠電泳測定一下可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的相對(duì)分子量，非變性凝膠電泳可以測定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量，但有時(shí)不太準(zhǔn)，因?yàn)檫�與蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象有關(guān)系。因?yàn)榉肿雍Y層析或者凝膠電泳測定一下可能的BSA（牛血清白蛋白的聚合體的相對(duì)分子量）多少都是BSA大致呈現(xiàn)倍數(shù)關(guān)系。所以可以測定出來。至于有人說：分子篩層析上樣聚合體會(huì)堵住層析柱，這是可能的，不過上樣前應(yīng)該過濾除去不溶物，不然不僅分子篩層析會(huì)堵，非變性凝膠電泳照樣也走不動(dòng)。這樣可以按測出來BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的相對(duì)分子量。要知道BSA（牛血清白蛋白）的聚合體的在溶液中的含量，那么只要在非變性條件下，把可能的BSA（牛血清白蛋白）的聚合體按照不同聚合程度的相對(duì)分子量分離出來，然后用福林酚方法、紫外吸收法可以通過光譜檢測出來溶液中的蛋白質(zhì)的含量，另外也可以從層析柱的色譜峰的面積讀出蛋白質(zhì)的含量（有專門的積分儀器和軟件）。 具體可以參考： 1.呂憲禹 主編，蛋白質(zhì)純化實(shí)驗(yàn)方案與應(yīng)用，化學(xué)工業(yè)出版社，2010， http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6307126 2.汪正范 編著，色譜定性與定量，化學(xué)工業(yè)出版社，2000. http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=6427417 |
7樓2014-08-24 16:38:49
qlw4567
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2樓2013-05-10 09:20:19
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3樓2013-05-10 11:17:17
qlw4567
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4樓2013-05-10 15:23:05
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