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[求助]
全長基因表達(dá),關(guān)于酶切位點,關(guān)于ORF
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| 我拿到的基因有2700bp左右,ORF大概在500-1900這個位置。我想表達(dá)這個基因,我該如何設(shè)計上下游引物,離ORF外測多遠(yuǎn)?還是越近越好?再弱弱的問一句:酶切位點是目的序列上本來就有還是設(shè)計引物的時候認(rèn)為加上去的? |

木蟲 (著名寫手)
胖虎愛唱歌
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是的,你應(yīng)該聽這個老師的。因為我做的都是只需要在細(xì)菌里表達(dá),是不需要這段序列的,但是別的情況是有需要的。我以前用gateway 系統(tǒng)的時候手冊里有提到:Inclusion of the Shine-Dalgarno and Kozak consensus sequence allows protein expression in both E. coli and mammalian cells. 另外也要看你表達(dá)的載體是怎樣的。具體情況具體分析。 |

木蟲 (正式寫手)
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您是什么意思?表達(dá)基因?完整的基因? 若是完整的基因,當(dāng)然是整個ORF全長啦。從ATG到終止密碼子這全部。就卡這一段,堿基必須一個不多一個不少。 在這,您這酶切位點是用來干嘛的?若是為以后連載體用的,就是在加在引物的5‘端之前。具體的方法你找找酶切引物設(shè)計方面的資料,上面肯定很詳細(xì)的介紹如何設(shè)計。別忘了加保護堿基。。。 ![]() ![]() |

木蟲 (著名寫手)
胖虎愛唱歌

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