 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5630 | 回復: 14 | ||
jiangyinshen木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
siRNA轉染效率 已有2人參與
|
|
請教各位大神，敝人從上海吉瑪訂的siRNA（A套餐），其中包括NC-FAM，于是這幾天按照invitrogen的protocol做了轉染，但是轉染24h和48h均未觀察到熒光，視野下一片漆黑，什么都沒有，不知道是什么原因，百思不得其解！ 轉染過程嚴格避光，不存在猝滅問題，我將siRNA貯存液（20umol）滴到載片上置于熒光顯微鏡下觀察，綠色熒光非常強烈，說明試劑有效，但是我就是想不通為什么轉染48h還沒有一點熒光，求各路高手解答，謝謝！ 附我的轉染步驟：我做的是子宮內膜間質細胞，種在6孔板，細胞均勻分布，接種24h之內細胞密度達到70%左右做的轉染。（1）轉染前30min按1.5ml/孔給細胞換液，放回孵箱；（2）每孔250ul無血清培養(yǎng)基溶解5ul siRNA，輕柔混勻，室溫靜置5min；（3）每孔250ul無血清培養(yǎng)基溶解10ul Lipofectamin2000，輕柔混勻，室溫靜置5min；（4）將充分溶解的siRNA和Lipofectamin2000混合，輕柔混勻，室溫靜置20min；（5）將上述混合物加入孔板中，完成轉染。轉染后6h用完全培養(yǎng)基換液。轉染后24h、48h、72h和96h分別收取細胞沉淀，NC-FAM組在熒光顯微鏡下觀察，檢測轉染效率。 [ 來自小組 生物醫(yī)藥家族 ] |
回復此樓» 猜你喜歡
南京大學化學調劑
已經(jīng)有11人回復
-
材料專碩調劑
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿華東師范大學有機化學專業(yè)，初試351分，復試被刷求調劑!
已經(jīng)有5人回復
-
283求調劑（080500）
已經(jīng)有7人回復
-
311求調劑
已經(jīng)有6人回復
-
275求調劑
已經(jīng)有20人回復
-
各位老師好，我的一志愿為北京科技大學085601材料專碩
已經(jīng)有9人回復
-
294分080500材料科學與工程求調劑
已經(jīng)有8人回復
-
一志愿北京工業(yè)大學，324分求調劑
已經(jīng)有5人回復
-
一志愿武漢理工，總分321，英一數(shù)二，求老師收留。
已經(jīng)有11人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教siRNA轉染的幾個問題
已經(jīng)有11人回復
- SIRNA
已經(jīng)有34人回復
- 幾段中文翻譯成英文 急求呀 拜托大家?guī)蛶兔?/a>
已經(jīng)有6人回復
- 【求助/交流】我想問下瞬時轉染和穩(wěn)定轉染。。。
已經(jīng)有8人回復
- 【分享】推薦一款性能最實用的轉染試劑
已經(jīng)有14人回復
chnfhjxl
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 515.3
- 帖子: 48
- 在線: 115.4小時
- 蟲號: 1468126
- 注冊: 2011-10-30
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
2樓2013-05-17 13:30:25
jiangyinshen
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 31 (小學生)
- 金幣: 2207.2
- 紅花: 1
- 帖子: 2442
- 在線: 128.6小時
- 蟲號: 990634
- 注冊: 2010-04-07
- 專業(yè): 生殖生物學
3樓2013-05-18 19:54:23
dongxie1982
銅蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應助: 55 (初中生)
- 金幣: 69.9
- 紅花: 1
- 帖子: 335
- 在線: 95.9小時
- 蟲號: 1514344
- 注冊: 2011-11-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
4樓2013-05-19 11:02:58
chnfhjxl
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 515.3
- 帖子: 48
- 在線: 115.4小時
- 蟲號: 1468126
- 注冊: 2011-10-30
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
5樓2013-05-19 12:31:24
jiangyinshen
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 31 (小學生)
- 金幣: 2207.2
- 紅花: 1
- 帖子: 2442
- 在線: 128.6小時
- 蟲號: 990634
- 注冊: 2010-04-07
- 專業(yè): 生殖生物學
6樓2013-05-20 23:36:06
dongxie1982
銅蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 2
- 應助: 55 (初中生)
- 金幣: 69.9
- 紅花: 1
- 帖子: 335
- 在線: 95.9小時
- 蟲號: 1514344
- 注冊: 2011-11-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
7樓2013-05-22 17:12:25
jiangyinshen
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 31 (小學生)
- 金幣: 2207.2
- 紅花: 1
- 帖子: 2442
- 在線: 128.6小時
- 蟲號: 990634
- 注冊: 2010-04-07
- 專業(yè): 生殖生物學
8樓2013-05-26 13:33:39
9樓2013-07-17 20:54:27
|
1.Lipofectamin2000已經(jīng)是個很古老的東西了，siRNA轉染建議你用Life的RNAi MAx轉染試劑，這個效率是大家公認的，關于國產(chǎn)的siRNA轉染試劑，我不想說太多，勸大家不要去嘗試，這個不是從洋媚外，差距是真實存在的； 2.Fam-NC是看轉染效率的，因為fam是化學合成的熒光基團，曝光太久會淬滅的，所以保存的是棕色的管子，培養(yǎng)箱也要避光，必須是6小時換液的時候看，如果樓主要看看是淬滅了還是沒轉染進去，你可以在換液前看一下熒光，如果有熒光就證明沒有淬滅，換液后熒光要是沒有了那就是沒轉染進去呀，這個道理大家懂吧； 3.關于siRNA套裝，強烈像大家推薦Transheep的siRNA套裝，性價比超高，4個靶點的套裝比其他公司3個的優(yōu)惠，還有禮品送，大家可以去訂購一下試試！ |
10樓2015-05-04 01:02:07
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 jiangyinshen 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩調劑 +5 | 椰椰。 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 283求調劑（080500） +7 | A child 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學，324分求調劑 +5 | 零八# 2026-03-28 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
[考研] 279求調劑 +4 | 蝶舞輕繞 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 316求調劑 +7 | 江辭666 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 320分，材料與化工專業(yè)，求調劑 +9 | 一定上岸aaa 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調劑 +9 | 大饞小子 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 347求調劑 +3 | 山頂見α 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703本科鄭州大學求調劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 286求調劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 274求調劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +10 | 呼呼？~+123456 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
材料學碩，求調劑
 6+5
|
糖葫蘆888ll 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調劑 +3 | 邱gl 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +17 | 碩星赴 2026-03-23 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化315 求調劑 +3 | akrrain 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大化學322求調劑 +4 | 17501029541 2026-03-23 | 6/300 |
|