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miRNA做完熒光定量需要跑焦嗎？
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我反轉(zhuǎn)錄時(shí)用的頸環(huán)引物，real-time用的Taqman探針，特異性方面應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題吧，但是做了一個(gè)無(wú)模板對(duì)照竟然也有產(chǎn)物，所以其他的結(jié)果也都不可靠了，就想跑焦看一下片段長(zhǎng)度。（雖然也可能是樣太多我加錯(cuò)了，不過(guò)可能性不大） 但是跑焦的話目的片段應(yīng)該是有多長(zhǎng)呢？用的產(chǎn)品里面沒(méi)有說(shuō)明各種引物的長(zhǎng)度，我查了一些別人做的引物設(shè)計(jì)，好像最終結(jié)果是比原有的miRNA長(zhǎng)40bp，是這樣嗎？ 還有就是用聚丙烯酰胺凝膠電泳的話多大濃度合適？ 在此請(qǐng)教各位，望不吝賜教，謝謝��！ |
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3樓2013-05-16 19:01:49
bullfrog325
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2樓2013-05-16 17:25:33
bullfrog325
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問(wèn)題。 2013-05-16 22:46:43
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)積極發(fā)帖幫助解答問(wèn)題。 2013-05-16 22:46:43
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樓主這個(gè)不像是引物啊, 像是一個(gè)miRNA前體. 你可以把你的"引物"序列用網(wǎng)上預(yù)測(cè)RNA折疊的工具看看, 比如: http://rna.tbi.univie.ac.at/cgi-bin/RNAfold.cgi |
4樓2013-05-16 20:30:56
5樓2013-05-17 14:47:26
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