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云中鴻雁新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助 SSCP染色方法
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我要做SSCP，發(fā)現(xiàn)染色的方法有很多，比如1）1．固定。把膠卸下，做好起始記號(hào)，放入70%乙醇中在搖床上固定15min。固定好后乙醇回收（可以重復(fù)使用5次左右），蒸餾水洗兩遍，每遍3min左右。若同時(shí)染兩塊膠固定和洗脫都要適當(dāng)增加時(shí)間。 2．染色。染色液（200ml染色液含3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml）染色30min，同時(shí)染兩塊膠要適當(dāng)增加時(shí)間，需40min左右。倒掉染色液，洗3遍，每遍3min，同時(shí)染兩塊膠要適當(dāng)增加時(shí)間。 3．顯色。顯色液（200ml顯色也包含1%檸檬酸鈉1ml，甲醛100ul）至清晰。倒掉顯色液，加蒸餾洗脫3次停顯。 2）. 固定 采用10%乙酸進(jìn)行固定。取450ml存水，加入冰醋酸50ml混合，倒入容器中放在搖床上固定30min；水洗三次，每次2min； 2. 染色 采用0.1%硝酸銀染色，取0.4g硝酸銀加入到400ml存水中，再加入甲醛500μl，輕搖25min（用黑布蓋好）；水洗20s； 3. 顯色 25%碳酸鈉，取12.5g碳酸鈉加入500ml純水中(-20°冷卻的)，加入甲醛500μl，Na2S2O3100μl(100mg/mL)； 4. 固定 10%乙酸固定，10min； 放入純水中即可。 3） 固定 把膠卸下，做好起始記號(hào)，放入約80ml固定液（50ml無(wú)水乙醇，2.5ml冰乙酸，定容到500ml，冷藏）中在搖床上固定10min。 2. 染色 60ml染色液（0.75gAgNO3，溶入500ml水中，避光保存）+60µl甲醛， 染色6min。蒸餾水洗滌一次。 3 顯色 60ml顯色液（7.5g NaOH，溶于500ml水）+120µl甲醛，放到搖床上顯色至條帶清晰。倒掉顯色液，加蒸餾停止顯色 4）將PAG板用去離子水洗二次，浸入10%乙醇和0.5%冰醋酸溶液固定6min。用去離子水洗兩次，再浸入0.2%AgNO3溶液中10min，用去離子水洗3-5次，然后浸入1.5%NaOH和0.4%甲醛溶液中顯色7min。最后，用0.75%%NaCO3終止顯色。 求助各位，哪種方法比較好啊！謝謝�。�！ |
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