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馬血清的成分與牛血清的不同
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馬血清的成分與牛血清的不同? 培養(yǎng)細胞為什么加胰島素? 我沒有養(yǎng)過細胞只是在文獻里看到的想學(xué)習(xí)一下 |
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專家顧問 (著名寫手)
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養(yǎng)細胞一般用的都是胎牛血清,沒有聽過你說的那個血清。 還有你說的加胰島素,一般都是家青霉素和鏈霉素的,胰島素針對特定的細胞吧。 這是之前養(yǎng)過的細胞,你可以參考一下。 消化法原代培養(yǎng)兔胸主動脈平滑肌細胞 用DMEM配0.2%的1型膠原酶(用20的血清的DMEM配可能更好,有類似文獻),分裝于青霉素小并,每并2-3ml。1只免的胸主動脈置于1 瓶消化液中消化,消化約10幾個小時(消化程度的把握要體會),離心后,接種(若見細胞量大,成功把握大),絕對靜置3天(沒必要看,看多了無益),8天可傳代。 犬胸主動脈平滑肌貼塊法—— 方法成熟,比消化法好控制的多。 1、取材過程要快,取好放4度儲存的D-hanks液帶入超凈臺,不然先天不足; 2、塊大小密度影響不是很大(盡量。P(guān)鍵是邊緣要盡量整齊,選用快刀快剪; 3、一定要貼牢,翻瓶時間個人不一,有3-5小時的,也有貼塊直接翻瓶的,關(guān)鍵還是貼牢,另外在貼牢的基礎(chǔ)上盡量早接觸培液,可以在剪塊的時候加少量培液略濕潤,鑷子夾塊到培養(yǎng)瓶后,用吸管之類的細長工具將塊均勻鋪好,加剛好覆蓋組織塊的培養(yǎng)液量(25cm2培養(yǎng)瓶大概2ml),半小時到一小時內(nèi)就可翻瓶,動作要輕,從培養(yǎng)瓶一角試著翻,如果塊飄起,則再過會翻; 4、貼塊無內(nèi)膜外膜面之分,亦無需刮除內(nèi)膜,若內(nèi)膜面向下,會有少量內(nèi)皮細胞爬出組織塊,但只要平滑肌細胞一旦爬出來,內(nèi)皮細胞生長自然不占優(yōu)勢,會因為平滑肌細胞大量爬出、增殖而漂起來,換液可洗掉,另外傳代可純化平滑肌細胞。 5、培液Gibco的 DMEM(高糖4500mg/L)加四季清新生牛血清20%。 建議用1次性培養(yǎng)瓶,成功機會大于玻璃瓶。成功后再小心過度成玻璃瓶。塊愈小愈好。用新刀,快,損傷小。全過程越短越好。組織塊的邊緣不齊整也不是什么很關(guān)鍵的問題,最重要的是組織塊要盡量小,盡量能剪成小米粒大;另外就是組織塊要貼牢,其關(guān)鍵就是培養(yǎng)液可以在6小時后翻瓶的時間再加,這樣就可以避免組織塊貼不牢而懸浮起來的尷尬了。 期待可以幫到你 |
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