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maliyuan0924鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
馬血清的成分與牛血清的不同
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馬血清的成分與牛血清的不同？ 培養(yǎng)細(xì)胞為什么加胰島素？ 我沒(méi)有養(yǎng)過(guò)細(xì)胞只是在文獻(xiàn)里看到的想學(xué)習(xí)一下 |
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4樓2013-05-30 13:27:01
myprayer
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myprayer: 回帖置頂 2013-05-30 10:21:03
maliyuan0924: 金幣+1 2013-06-16 20:56:44
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maliyuan0924: 金幣+1 2013-06-16 20:56:44
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養(yǎng)細(xì)胞一般用的都是胎牛血清，沒(méi)有聽(tīng)過(guò)你說(shuō)的那個(gè)血清。 還有你說(shuō)的加胰島素，一般都是家青霉素和鏈霉素的，胰島素針對(duì)特定的細(xì)胞吧。 這是之前養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞，你可以參考一下。 消化法原代培養(yǎng)兔胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 用DMEM配0.2%的1型膠原酶（用20的血清的DMEM配可能更好，有類(lèi)似文獻(xiàn)），分裝于青霉素小并，每并2-3ml。1只免的胸主動(dòng)脈置于1 瓶消化液中消化，消化約10幾個(gè)小時(shí)（消化程度的把握要體會(huì)），離心后，接種（若見(jiàn)細(xì)胞量大，成功把握大），絕對(duì)靜置3天（沒(méi)必要看，看多了無(wú)益），8天可傳代。 犬胸主動(dòng)脈平滑肌貼塊法—— 方法成熟，比消化法好控制的多。 1、取材過(guò)程要快，取好放4度儲(chǔ)存的D-hanks液帶入超凈臺(tái)，不然先天不足； 2、塊大小密度影響不是很大（盡量小），關(guān)鍵是邊緣要盡量整齊，選用快刀快剪； 3、一定要貼牢，翻瓶時(shí)間個(gè)人不一，有3－5小時(shí)的，也有貼塊直接翻瓶的，關(guān)鍵還是貼牢，另外在貼牢的基礎(chǔ)上盡量早接觸培液，可以在剪塊的時(shí)候加少量培液略濕潤(rùn)，鑷子夾塊到培養(yǎng)瓶后，用吸管之類(lèi)的細(xì)長(zhǎng)工具將塊均勻鋪好，加剛好覆蓋組織塊的培養(yǎng)液量（25cm2培養(yǎng)瓶大概2ml），半小時(shí)到一小時(shí)內(nèi)就可翻瓶，動(dòng)作要輕，從培養(yǎng)瓶一角試著翻，如果塊飄起，則再過(guò)會(huì)翻； 4、貼塊無(wú)內(nèi)膜外膜面之分，亦無(wú)需刮除內(nèi)膜，若內(nèi)膜面向下，會(huì)有少量?jī)?nèi)皮細(xì)胞爬出組織塊，但只要平滑肌細(xì)胞一旦爬出來(lái)，內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)自然不占優(yōu)勢(shì)，會(huì)因?yàn)槠交〖?xì)胞大量爬出、增殖而漂起來(lái)，換液可洗掉，另外傳代可純化平滑肌細(xì)胞。 5、培液Gibco的 DMEM（高糖4500mg/L）加四季清新生牛血清20%。 建議用1次性培養(yǎng)瓶，成功機(jī)會(huì)大于玻璃瓶。成功后再小心過(guò)度成玻璃瓶。塊愈小愈好。用新刀，快，損傷小。全過(guò)程越短越好。組織塊的邊緣不齊整也不是什么很關(guān)鍵的問(wèn)題，最重要的是組織塊要盡量小，盡量能剪成小米粒大��；另外就是組織塊要貼牢，其關(guān)鍵就是培養(yǎng)液可以在6小時(shí)后翻瓶的時(shí)間再加，這樣就可以避免組織塊貼不牢而懸浮起來(lái)的尷尬了。 期待可以幫到你  |
3樓2013-05-30 10:20:44
5樓2015-03-09 16:18:02
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