 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2123 | 回復: 8 | ||
| 本帖產生 1 個 MicEPI ，點擊這里進行查看 | ||
[求助]
重組牛胰蛋白酶在畢赤酵母中的表達 已有1人參與
|
||
|
我們做的是重組牛胰蛋白酶，用的是畢赤酵母GS115 表達量比較低，western blot才能看見 怎么辦呢 |
回復此樓» 猜你喜歡
08工學調劑
已經有11人回復
-
350求調劑
已經有6人回復
-
求調劑一志愿武漢理工大學材料工程（085601）
已經有4人回復
-
一志愿重慶大學085700資源與環(huán)境，總分308求調劑
已經有6人回復
-
接收2026碩士調劑(學碩+專碩)
已經有6人回復
-
081700 調劑 267分
已經有5人回復
-
328求調劑
已經有4人回復
-
0854 考研調劑 招生了！AI 方向
已經有14人回復
-
招08考數(shù)學
已經有14人回復
-
一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調劑
已經有4人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 畢赤酵母發(fā)酵表達蛋白量的測定
已經有5人回復
- 關于酵母表達所用的載體pPICZaA表達蛋白大小
已經有5人回復
- 畢赤酵母表達重組蛋白遇到大難題
已經有20人回復
- 畢赤酵母表達時的雜蛋白問題
已經有16人回復
- 畢赤酵母表達實驗設計
已經有6人回復
- 外源蛋白在畢赤酵母中不表達
已經有18人回復
- 重組酵母表達了，但是蛋白沒有了活力是什么原因
已經有5人回復
- 求白蛋白在畢赤酵母分泌表達后被蛋白酶降解的解決辦法
已經有3人回復
- 畢赤酵母重組子的篩選
已經有5人回復
- 限制性內切酶酶切位點匯總
已經有185人回復
- 畢赤酵母基因重組時遇到困難了
已經有9人回復
- 求教，在重組畢赤酵母菌體培養(yǎng)的過程中，培養(yǎng)基的pH逐漸下降是什么原因呢，
已經有8人回復
heroxuning
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 1798.3
- 紅花: 5
- 帖子: 391
- 在線: 972小時
- 蟲號: 872465
- 注冊: 2009-10-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質組學
2樓2013-05-25 20:24:40
3樓2013-05-25 21:25:41
heroxuning
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 1798.3
- 紅花: 5
- 帖子: 391
- 在線: 972小時
- 蟲號: 872465
- 注冊: 2009-10-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質組學
4樓2013-05-25 21:52:20
wujunyi354
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 14
- 帖子: 11
- 在線: 5.2小時
- 蟲號: 2250021
- 注冊: 2013-01-19
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
5樓2013-12-06 13:32:54
6樓2014-07-22 16:27:26
7樓2014-07-22 16:27:58
reallpf
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 21
- 應助: 150 (高中生)
- 金幣: 3388.3
- 散金: 2
- 紅花: 12
- 帖子: 342
- 在線: 72.6小時
- 蟲號: 1892494
- 注冊: 2012-07-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
anruoka: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 很詳細，謝謝。 2014-07-24 13:07:04
laozuzunzhe: MicEPI+1, good！ 2014-07-24 18:00:33
anruoka: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 很詳細，謝謝。 2014-07-24 13:07:04
laozuzunzhe: MicEPI+1, good！ 2014-07-24 18:00:33
|
WB能檢測到，那肯定是成功表達了，理論方面也是成立的，沒有大問題。 但是畢赤酵母表達外源蛋白表達量低的問題可以從如下方面考慮： 1. 設計方面 a. 該酶是否有關乎表達、折疊等合成過程中關鍵的酶原或片段。 b. 胞內表達還是胞外表達？一般胞內表達容易受到內毒性的限制；而胞外表達容易受到分泌限制。大多還是設計胞外表達，產酶容易分離純化。 c. 組成型表達還是誘導型表達？兩種表達方式，在后續(xù)發(fā)酵過程中差別是非常大的。但并不是說一種表達方式一定比另一種高，不同的酶情況不同。一般是兩種情況都會做，然后比較。 d. 高拷貝表達：又有2中策略，一是構建高拷貝質粒載體，然后轉化篩選重組菌；二是抗生素濃度篩選高拷貝重組菌。但顯然前者效果會更加明顯，兩個方法結合會篩選得到更高拷貝的重組菌。 2. 操作方面 a. 發(fā)酵菌種活力：一般選用新在YPD板上活化后的單菌落接種培養(yǎng)。 b. 設置一級種子液是非常有必要的。 c. 發(fā)酵起始OD值：理論上起始OD越大，表達量越高。但因受限于搖瓶或發(fā)酵罐的大小，而使得情況有所差異。可以考慮多組對照試驗。 d. 發(fā)酵溫度：一般是30度200 rpm，但有文獻表面低溫發(fā)酵，畢赤酵母表達外源蛋白量會增加，可以嘗試25-28度。 e. 發(fā)酵pH：畢赤酵母發(fā)酵過程中，會不斷產酸。因此發(fā)酵過程中可使用氨水調pH，同時還可以補充氮源。 f. 誘導時間（限誘導型表達方式）：一般在擴增培養(yǎng)達到一定OD值后才會進行甲醇誘導，同時誘導是否成功是關鍵。若誘導失敗，產量會非常低，甚至SDS-PAGE都檢測不到。 g. 補料（組成型表達尤為重要）：在發(fā)酵液OD值逐漸增大的情況下，需要合理補料，控制溶氧在合適的范圍使得菌種迅速增殖產酶。 暫時只能想起這么多，有問題可以多討論。 |
8樓2014-07-23 15:24:20
553173045
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 72.5
- 帖子: 24
- 在線: 20.5小時
- 蟲號: 1665198
- 注冊: 2012-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
9樓2015-02-06 14:39:31
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 anruoka 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 350求調劑 +6 | weudhdk 2026-03-19 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 工科材料085601 279求調劑 +8 | 困于星晨 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 北科281學碩材料求調劑 +8 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研化學308分求調劑 +5 | 你好明天你好 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 307求調劑 +3 | 余意卿 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +10 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學化學070300，求調劑
+7
|
2117205181 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 310求調劑 +4 | baibai1314 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324求調劑 +6 | lucky呀呀呀鴨 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學一志愿985，分數(shù)349求調劑 +4 | zxts12 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286求調劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 311求調劑 +3 | 勇敢的小吳 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279求調劑 +5 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調劑 +12 | yangfz 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調劑 +12 | 墨墨漠 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +9 | Ncdx123456 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 招收調劑碩士 +4 | lidianxing 2026-03-19 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 生物學調劑招人�。。� +3 | 山海天嵐 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|