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wpwrn銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
融合PCR
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兩個(gè)片段進(jìn)行融合,一個(gè)不到200.一個(gè)2000多,怎么都容不上去?怎么辦? 我的做法 CR產(chǎn)物各1ul,退火程序?yàn)椤 ?4℃ 5min變性,進(jìn)入PCR循環(huán):94℃ 30s,60℃ 30s,72℃ 2min30s,10個(gè)循環(huán),最后延伸72℃ 5min。然后加引物 實(shí)在是容不出來(lái),求助,救命啊 |

鐵桿木蟲(chóng) (著名寫手)
木蟲(chóng) (正式寫手)
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在樓上的建議的基礎(chǔ)上: 檢查融合前的PCR程序, 確認(rèn)用的是不在末端加A的聚合酶 檢查預(yù)計(jì)融合的地方, 兩個(gè)片段重疊是不是足夠長(zhǎng), 否則要把退火溫度降下來(lái) 檢查引物(最遠(yuǎn)端的兩個(gè))是不是加了 |
銀蟲(chóng) (初入文壇)

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