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wpwrn銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
融合PCR
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兩個(gè)片段進(jìn)行融合，一個(gè)不到200.一個(gè)2000多，怎么都容不上去？怎么辦？ 我的做法  CR產(chǎn)物各1ul,退火程序?yàn)椤 ?4℃ 5min變性，進(jìn)入PCR循環(huán)：94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 2min30s，10個(gè)循環(huán)，最后延伸72℃ 5min。然后加引物 實(shí)在是容不出來，求助，救命啊 |
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stevenshi021
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-29 17:59:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-29 17:59:25
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好吧，我建議PCR使用 Phusion 或Q5（NEB）其極速，擴(kuò)增效率高，至于pfu我一般認(rèn)為超過2000的片段這個(gè)酶就有局限性了，擴(kuò)增效率比較低。如果一定要用這個(gè)傳統(tǒng)的PFU，可以試試touch-down。 實(shí)驗(yàn)要改革，使用最新的實(shí)驗(yàn)試劑！ |
wpwrn7樓2013-05-29 11:11:14
克隆大蝦
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2樓2013-05-28 21:52:20
bullfrog325
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3樓2013-05-28 22:57:57
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4樓2013-05-29 09:45:48
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