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小李愛(ài)學(xué)習(xí)銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
DEAE——Sepharose離子交換純化 流速變慢
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在做DEAE——Sepharose Fast Flow離子交換純化酶的研究，是用的NaCl梯度洗脫，剛開(kāi)始流速正常，但經(jīng)過(guò)7-8小時(shí)后流速就變慢了，需要再次提高泵的轉(zhuǎn)速，之后7-8小時(shí)后再次變慢，需要再次提高泵的轉(zhuǎn)速； 我用的是2年前師姐用過(guò)的柱材料，分離效果還不錯(cuò)，但就是出現(xiàn)流速變慢的情況；蠕動(dòng)泵是上海滬西的；上樣前樣液已經(jīng)過(guò)0.44um膜過(guò)濾了；是NaCl濃度逐漸增加導(dǎo)致的問(wèn)題嗎？我上樣的體積比較大，是不是樣品量太大把柱子堵了?但是梯度洗脫前用緩沖液沖洗雜蛋白的時(shí)候沒(méi)有堵��？ 還是別的原因請(qǐng)各位高手給小弟分析分析。 [ Last edited by 小李愛(ài)學(xué)習(xí) on 2013-5-29 at 10:42 ] |
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