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風(fēng)諾2010銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
RNAi表達(dá)載體構(gòu)建后，酶切切不開(kāi)，怎么回事？
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我有3個(gè)目的片段，分別在800,700和500左右，采用一步法與表達(dá)載體pBI-121植物表達(dá)載體連接，沒(méi)有采用構(gòu)建中間載體的方法， 但是我想這也不影響我的酶切吧，我用PCR檢測(cè)都有結(jié)果，PCR結(jié)果都顯示3個(gè)片段都連上了，但是就是酶切切不了，用同樣的酶切其他的質(zhì)粒都能切開(kāi)，就是切這個(gè)RNAi表達(dá)載體切不了，怎么回事，求大俠指點(diǎn)。之后再加50金幣。跪求。。。。。。。 |
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鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2013-06-08 17:08:00
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2樓2013-06-01 21:42:32
雄鷹飛翔
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【答案】應(yīng)助回帖
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風(fēng)諾2010: 金幣+5, ★有幫助 2013-06-30 17:08:20
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細(xì)的解答。 2013-06-30 17:18:16
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細(xì)的解答。 2013-06-30 17:18:16
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個(gè)人分析，問(wèn)題可能是： 1）酶切位點(diǎn)有問(wèn)題，因?yàn)橛行┢侥┒说拿盖形稽c(diǎn)，切割后在連接后就不可以在切割開(kāi)來(lái)； 2）酶切體系有問(wèn)題，主要是酶活性的失活，導(dǎo)致切不開(kāi) 3)同時(shí)注意質(zhì)粒的濃度 祝你好運(yùn)！ |
3樓2013-06-06 10:44:17
zgb1982
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2013-06-06 13:10:15
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