 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2043 | 回復(fù): 7 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MicEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
499649610金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
基因敲除 已有1人參與
|
|
| 最近做細(xì)菌（革蘭氏陰性菌）的基因敲除，利用同源重組的方式（雙交換），請(qǐng)問(wèn)我設(shè)計(jì)左右同源臂至少應(yīng)該多長(zhǎng)，左右同源臂是一樣長(zhǎng)好還是不一樣長(zhǎng)好？求指導(dǎo)！我有設(shè)計(jì)一邊500多，一邊260的樣子，是否可行？求指導(dǎo)!還有，做敲除的注意事項(xiàng)能否告知�。ㄎ矣玫馁|(zhì)粒是自殺性質(zhì)粒，不引入抗性基因） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
303求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料工程（專(zhuān)）一志愿985 初試335求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
299求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
083200學(xué)碩321分一志愿暨南大學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗(yàn)）
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
二本跨考鄭大材料306英一數(shù)二
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
志子
至尊木蟲(chóng) (文壇精英)
- MicEPI: 5
- 應(yīng)助: 2847 (講師)
- 貴賓: 0.743
- 金幣: 42456.9
- 散金: 3857
- 紅花: 299
- 帖子: 21362
- 在線(xiàn): 1136.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2471022
- 注冊(cè): 2013-05-19
- 專(zhuān)業(yè): 高分子組裝與超分子結(jié)構(gòu)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, good，回答的很全面 2013-06-07 09:18:59
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, good，回答的很全面 2013-06-07 09:18:59
|
非特異性回答，具體情況具體分析，僅供參考。 利用同源重組構(gòu)建基因敲除的基本步驟： a． 基因載體的構(gòu)建：把目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因特異片段同源的DNA 分子都重組到帶有標(biāo)記基因(如neo 基因，TK 基因等)的載體上，成為重組載體�；蚯贸菫榱耸鼓骋换蚴テ渖砉δ�，所以一般設(shè)計(jì)為替換型載體。 b．ES 細(xì)胞的獲得：現(xiàn)在基因敲除一般采用是胚胎干細(xì)胞，最常用的是鼠，而兔，豬，雞等的胚胎干細(xì)胞也有使用。常用的鼠的種系是１２９及其雜合體，因?yàn)檫@類(lèi)小鼠具有自發(fā)突變形成畸胎瘤和畸胎肉瘤的傾向，是基因敲除的理想實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。而其他遺傳背景的胚胎干細(xì)胞系也逐漸被發(fā)展應(yīng)用。 ｃ．同源重組：將重組載體通過(guò)一定的方式(電穿孔法或顯微注射)導(dǎo)入同源的胚胎干細(xì)胞(ES cell)中，使外源DNA與胚胎干細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組，將重組載體中的DNA序列整合到內(nèi)源基因組中，從而得以表達(dá)。一般地，顯微注射命中率較高，但技術(shù)難度較大，電穿孔命中率比顯微注射低，但便于使用。 ｄ．選擇篩選已擊中的細(xì)胞：由于基因轉(zhuǎn)移的同源重組自然發(fā)生率極低，動(dòng)物的重組概率為10－2～10-5，植物的概率為10－4～10－5。因此如何從眾多細(xì)胞中篩出真正發(fā)生了同源重組的胚胎干細(xì)胞非常重要。目前常用的方法是正負(fù)篩選法（PNS法），標(biāo)記基因的特異位點(diǎn)表達(dá)法以及PCR法。其中應(yīng)用最多的是PNS法。 ｅ．表型研究：通過(guò)觀(guān)察嵌和體小鼠的生物學(xué)形狀的變化進(jìn)而了解目的基因變化前后對(duì)小鼠的生物學(xué)形狀的改變，達(dá)到研究目的基因的目的。 f．得到純合體：由于同源重組常常發(fā)生在一對(duì)染色體上中一條染色體中,所以如果要得到穩(wěn)定遺傳的純合體基因敲除模型，需要進(jìn)行至少兩代遺傳. |
2樓2013-06-05 10:31:12
海驕子
銀蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 20 (小學(xué)生)
- 金幣: 211.9
- 帖子: 41
- 在線(xiàn): 6.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2211766
- 注冊(cè): 2012-12-28
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2013-06-06 14:53:16
499649610
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 23 (小學(xué)生)
- 金幣: 886.9
- 散金: 30
- 帖子: 109
- 在線(xiàn): 34.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1424423
- 注冊(cè): 2011-10-01
- 專(zhuān)業(yè): 臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)
4樓2013-06-06 23:10:07
5樓2013-06-07 10:21:34
muchong5577
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 929.2
- 散金: 67
- 紅花: 3
- 帖子: 675
- 在線(xiàn): 136.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 703384
- 注冊(cè): 2009-02-18
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
6樓2013-06-08 09:51:52
|
謝 |
7樓2013-06-14 22:27:37
梅在在
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 6
- 在線(xiàn): 5.7小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3018425
- 注冊(cè): 2014-03-05
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
8樓2014-05-16 16:07:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 499649610 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿南京理工大學(xué)085701資源與環(huán)境302分求調(diào)劑 +4 | 葵梓衛(wèi)隊(duì) 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂(lè)29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑 有科研經(jīng)歷 有二區(qū)文章 +22 | rare12345 2026-03-18 | 22/1100 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +3 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 261求B區(qū)調(diào)劑，科研經(jīng)歷豐富 +3 | 牛奶很忙 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 能源材料化學(xué)課題組招收碩士研究生8-10名 +5 | 脫穎而出 2026-03-16 | 14/700 |
|
|
|
[考博] 申博26年 +3 | 八6八68 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科鄭州大學(xué)物理學(xué)院，一志愿華科070200學(xué)碩，346求調(diào)劑 +4 | 我不是一根蔥 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑 可跨專(zhuān)業(yè) +3 | 626776879 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|