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15895241331鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
小分子蛋白的western blotting注意事項(xiàng)
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| 本人要跑11到17kD的蛋白質(zhì)，做了兩次無(wú)結(jié)果，分離膠15%，電泳100V 1.5h，轉(zhuǎn)膜350mA 45min， 封閉1h。求高搜指點(diǎn)一二！ |
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15895241331
鐵蟲 (正式寫手)
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4樓2013-06-07 12:14:04
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songzuowei
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| 我認(rèn)為一你的封閉時(shí)間太短，37°至少兩小時(shí)，二 轉(zhuǎn)膜時(shí)間太長(zhǎng)，這么小的蛋白，半干轉(zhuǎn)15min就足夠了 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2013-06-06 16:39:57
songzuowei
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我沒(méi)有提過(guò)組蛋白唉 封閉不是跟蛋白大小相關(guān)的，封閉的目的是將膜上的非特異性位點(diǎn)封閉掉，免得一抗與非特異性蛋白結(jié)合，出現(xiàn)雜帶，或者是背景太深，所以封閉時(shí)間不要太短，太長(zhǎng)了也不好，濕轉(zhuǎn)的話我不是很清楚哎 但是這么小的蛋白應(yīng)該很好轉(zhuǎn)的 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
5樓2013-06-07 12:31:31
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