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15895241331鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
小分子蛋白的western blotting注意事項
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| 本人要跑11到17kD的蛋白質(zhì)，做了兩次無結(jié)果，分離膠15%，電泳100V 1.5h，轉(zhuǎn)膜350mA 45min， 封閉1h。求高搜指點(diǎn)一二！ |
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songzuowei
木蟲 (著名寫手)
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我沒有提過組蛋白唉 封閉不是跟蛋白大小相關(guān)的，封閉的目的是將膜上的非特異性位點(diǎn)封閉掉，免得一抗與非特異性蛋白結(jié)合，出現(xiàn)雜帶，或者是背景太深，所以封閉時間不要太短，太長了也不好，濕轉(zhuǎn)的話我不是很清楚哎 但是這么小的蛋白應(yīng)該很好轉(zhuǎn)的 |
158952413315樓2013-06-07 12:31:31
kx444555
至尊木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-06-06 15:18:01
songzuowei
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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15895241331(myprayer代發(fā)): 金幣+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
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| 我認(rèn)為一你的封閉時間太短，37°至少兩小時，二 轉(zhuǎn)膜時間太長，這么小的蛋白，半干轉(zhuǎn)15min就足夠了 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2013-06-06 16:39:57
15895241331
鐵蟲 (正式寫手)
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4樓2013-06-07 12:14:04
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