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xingfuxiaoyu新蟲 (初入文壇)
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western 中，目的蛋白沒(méi)有，但是Marker 暴出來(lái)了，什么原因啊
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各位蟲友： 我最近在做Western 實(shí)驗(yàn)，奇怪的是，目的蛋白沒(méi)出來(lái)，Marker 和一些很大分子量的雜蛋白暴出來(lái)了，到底是什么原因��？ 1. 我把ECL 染液滴到二抗上，它會(huì)發(fā)光，而且有雜蛋白暴出來(lái)，說(shuō)明染液和二抗也沒(méi)問(wèn)題吧？ 2.我在轉(zhuǎn)膜后，用立春紅對(duì)NC膜進(jìn)行了染色，條帶很清晰，對(duì)轉(zhuǎn)膜后的凝膠用考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色，條帶很弱， 說(shuō)明我的轉(zhuǎn)膜是成功的。 3.我用1：1000的比例稀釋一抗，在 4度下孵育過(guò)夜，第二天在孵育二抗，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 4.在滴上顯色液后，MARKER 位置上會(huì)顯示很亮的熒光，可其余地方?jīng)]有，就讓我很奇怪。 自己初學(xué)，沒(méi)什么經(jīng)驗(yàn)，希望得到大家的指導(dǎo)，謝謝 |
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ankang0910
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【答案】應(yīng)助回帖
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的確，理論上marker是不能顯影的，因?yàn)樗荒芘c你的特異性很強(qiáng)的一抗反應(yīng)。但marker也是蛋白，也就會(huì)存在與IgG抗體結(jié)合的可能性。有些公司生產(chǎn)的marker就明確指出可以和各類IgG抗體反應(yīng)，以達(dá)到顯影時(shí)出現(xiàn)marker條帶的目的。如果你的一抗不純，是多抗，特異性不好，或是反復(fù)用過(guò)很多次，誰(shuí)也不敢保證不與marker反應(yīng)從而顯出條帶來(lái)。所以我才會(huì)猜測(cè)你的一抗有可能失效了。嘿嘿，以上是我個(gè)人的理解，希望可以幫到你。祝實(shí)驗(yàn)順利�。� |
12樓2012-07-23 10:49:38
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ankang0910
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