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【求助/交流】western blot中,蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎,怎么還能和一抗結(jié)合? 已有12人參與
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western blot中,蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎? 天然構(gòu)想被破壞了,特異性識(shí)別位點(diǎn)也被破壞了,怎么還能和一抗結(jié)合? |
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| 與Southern或Northern雜交方法類(lèi)似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。 |
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